Anti-hepatocellular carcinoma effect of combination of Xuedansu Tablets with doxorubicin on enhancing immunogenic cell death
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目的 研究雪胆素片联合阿霉素协同抗肝癌的作用,以及对细胞免疫原性死亡相关蛋白表达的调控.方法 采用高效液相色谱法对雪胆素片主要成分进行分析;采用MTT法考察雪胆素片与阿霉素联合使用对人肝癌HepG2细胞存活率的影响;采用平板克隆观察雪胆素片与阿霉素联合使用对HepG2细胞集落形成的影响;采用流式细胞仪分析雪胆素片与阿霉素联合使用对HepG2细胞凋亡率和细胞周期的影响;采用免疫荧光检测免疫原性细胞死亡关键指标钙网蛋白(calreticulin,CRT)和高迁移率蛋白1(high mobility group protein Bl,HMGB1)表达;采用ELISA法检测细胞内外三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)浓度.建立小鼠肝癌H22细胞皮下移植瘤模型观察雪胆素片与阿霉素联合使用的体内抗肿瘤效果;采用免疫组化法检测小鼠肿瘤组织CRT和HMGB1表达;采用苏木素-伊红(HE)染色法观察雪胆素片与阿霉素联合使用对小鼠心肌毒性的影响.结果 雪胆素片联合阿霉素对HepG2细胞具有浓度相关性的细胞毒性和促凋亡作用,可促进CRT膜外暴露,HMGB1向胞外分泌,ATP胞外浓度增加;雪胆素片联合阿霉素可抑制H22细胞小鼠皮下移植瘤的生长,提高免疫能力,延长其生存期,增加小鼠皮下肿瘤组织内CRT和HMGB1蛋白阳性表达的细胞数量.结论 雪胆素片联合阿霉素的抗肝癌作用可能与调节免疫原性死亡相关蛋白表达有关..
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