目的 采用指纹图谱技术结合化学计量学分析方法,探究不同发酵程度建曲中化学成分的差异性,筛选差异性标志物,为规范建曲炮制工艺、建立饮片质量标准提供参考.方法 采用Waters SunFire C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱,以乙腈-0.1％乙酸水溶液为流动相梯度洗脱,体积流量1.0 mL/min,检测波长280 nm,柱温30℃,进样体积10 μL,建立不同发酵时间建曲HPLC指纹图谱,采用中药色谱指纹图谱相似度评价软件(2004A版)进行相似度评价,标定共有峰并进行指认及归属;以共有峰峰面积为指标,利用层次聚类分析法(hierarchical cluster analysis,HCA)对不同发酵时间建曲进行区分,再借助正交偏最小二乘-判别分析法(orthogonal partial least square-discriminant analysis,OPLS-DA)筛选出不同发酵程度建曲间差异性标志物;建立多指标成分含量测定方法,对多个差异性标志物进行定量分析.结果 不同发酵时间建曲指纹图谱相似度大于0.900,共标定46个共有峰,指认并归属21个成分;HCA结果显示9个不同发酵时间建曲可聚类为4个发酵阶段;OPLS-DA结果表明不同发酵阶段建曲间差异性标志物略有不同,芹菜素、新橙皮苷、峰28、柚皮苷、橙皮苷和木犀草素为不同发酵程度建曲的主要差异性标志物;对5个已知差异性标志物进行定量研究,发酵过程中,柚皮苷、新橙皮昔质量分数呈下降趋势,分别从0.048 5％、0.046 4％下降至0.014 8％、0.001 8％,芹菜素、木犀草素质量分数呈上升趋势,由0.007 8％、0.029 3％上升至0.019 8％、0.085 2％,橙皮苷质量分数在0.307 9％～0.341 6％波动;以5个差异性标志物含量为指标,进行热图聚类分析,结果与HCA结果一致.结论 建立的方法可有效区分不同发酵时间建曲,为建曲的质量控制及评价提供参考.
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