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熟地黄的大麻素2型受体激动剂活性及对骨代谢的调控作用研究

Agonistic activity of Rehmanniae Radixx Praeparata on cannabinoid receptor 2 and its regulatory effects on bone metabolism

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目的 探究熟地黄的大麻素2型受体(cannabinoid receptor 2,CB2R)激动活性及其对骨代谢的调控作用.方法 采用双荧光素酶报告基因建立CB2R调节剂筛选体系;分别给予熟地黄提取物或CB2R选择性激动剂HU308或CB2R反向激动剂AM630处理,采用CCK-8法测定成骨细胞和破骨细胞的增殖活性;采用磷酸苯二钠法测定成骨细胞碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)和破骨细胞抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acid phosphatase,TRAP)的活性;采用流式细胞仪测定成骨细胞的细胞周期;采用ALP染色观察成骨细胞分化;采用茜素红染色观察成骨细胞骨矿化结节的形成;采用TRAP染色观察破骨细胞数目;采用罗丹明-鬼笔环肽染色镜观察破骨细胞F-肌动蛋白(F-actin)环的结构和形态;采用Western blotting检测CB2R及骨代谢相关蛋白的表达.结果 500 μg/mL熟地黄显著升高HEK293-CB2R细胞CB2R表达(P＜0.001),抑制 forskolin 刺激的 HEK293-CB2R 细胞中环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)的产生,并且其对CB2R的激动活性可被AM630逆转(P＜0.001).500 μg/mL熟地黄显著促进成骨细胞增殖(P＜0.001),升高ALP活性(P＜0.001),促进骨矿化结节形成,上调CB2R及骨形成相关蛋白的表达(P＜0.05、0.01、0.001),抑制p38的表达(P＜0.05);抑制破骨细胞形成分化,降低TRAP活性(P＜0.001),抑制F-actin环的形成,下调CB2R、p-p38和骨吸收相关蛋白的表达(P＜0.05、0.001);熟地黄对成骨细胞和破骨细胞的作用可被AM630逆转(P＜0.05、0.01、0.001).结论 熟地黄具有特异性的CB2R激动活性,并可通过CB2R调控成骨细胞和破骨细胞的功能.

胡思婧、练晨霞、张奇、周灏、史晓林、程刚、张泉龙、赵琦明、张巧艳、赵瑛、秦路平

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浙江中医药大学药学院,浙江杭州 310053

浙江省新华医院,浙江杭州 310000

咸阳市中心医院,陕西咸阳 712000

熟地黄 大麻素2型受体激动剂 双荧光素酶报告基因 成骨细胞 破骨细胞 地黄苷D

81973534

2022

10.7501/j.issn.0253-2670.2022.20.020

中草药
天津药物研究院,中国药学会

中草药

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：1.632
ISSN：0253-2670
年,卷(期)：2022.53(20)
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