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肝片吸虫候选检测抗原基因筛选及假定蛋白D915_000128的鉴定

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目的 筛选肝片吸虫cDNA表达文库,获得肝片吸虫感染候选检测抗原基因,经对筛选结果分析后选取假定蛋白D915_000128基因进行表达和反应原性鉴定.方法 利用绵羊肝片吸虫感染阳性血清对肝片吸虫cDNA表达文库进行筛选,以阳性噬菌斑为模板进行PCR扩增,对PCR产物测序并进行生物信息学分析和比较.通过PCR技术将选取的候选检测抗原基因片段进行扩增,并与原核表达载体pET-32a连接,构建重组表达质粒,经酶切鉴定正确后转化BL21感受态细胞,以异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,应用SDS-PAGE和Western blot对重组蛋白的大小及其反应原性进行分析和鉴定.结果 通过对肝片吸虫cDNA表达文库的筛选,成功获得了肝片吸虫候选检测抗原基因12个,其中2个为已报道的检测抗原基因(GenBank:PIS79729.1、ABC66278.1),10个为新发现的可用于肝片吸虫感染检测的候选抗原基因(GenBank:AYA57790.1、THD19001.1、TPP64335.1、PIS88126.1、AAA80273.1、THD26809.1、THD19926.1、TPP60711.1、THD26810.1、THD29021.1).成功构建假定蛋白D915_000128基因原核表达载体,其诱导表达产物经SDS-PAGE分析为85X103的重组融合蛋白,Western blot分析该重组蛋白可被绵羊肝片吸虫自然感染阳性血清识别,即具有反应原性.结论 筛选获得12个肝片吸虫候选检测抗原基因,分析比较选取了肝片吸虫假定蛋白D915_000128基因,构建的原核表达载体表达的重组蛋白具有良好的反应原性.
Screening of candidate antigen genes for Fasciola hepatica and identification of hypothetical protein D915_000128

刘少雄、张楠、王晓岑、李新、李建华、宫鹏涛、张西臣

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吉林大学动物医学学院人兽共患病研究教育部重点实验室,吉林长春130062

肝片吸虫 免疫学筛选 候选检测抗原基因 原核表达

吉林省科技发展计划吉林省科技发展计划

20200402044NC20190103075JH

2023

10.13350/j.cjpb.230309

中国病原生物学杂志
中华预防医学会,山东省寄生虫病防治研究所

中国病原生物学杂志

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：1.219
ISSN：1673-5234
年,卷(期)：2023.18(3)
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