目的 了解糖尿病条件下单核细胞受体相互作用蛋白140(RIP140)表达变化对其趋化血管内皮细胞能力的影响,为阻断糖尿病患者动脉粥样硬化始动过程提供科学依据.方法 体外培养人急性单核细胞白血病细胞(THP-1),分为阴性对照组、糖尿病条件组、RNA干扰(RNAi)阴性对照组及RIP140 RNAi组,每组细胞数5×105/ml,每组重复3个孔.阴性对照组未做特殊处理,其余3组给予33.3 mmol/L葡萄糖及500 µmol/L脂肪酸处理.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测THP-1上清细胞间黏附分子-1(ICAM-1)蛋白表达;将上述4组条件培养基作用于人脐静脉内皮细胞(HUVECs),采用蛋白质印迹实验(Western blot)检测HUVECs的ICAM-1及血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)蛋白表达;利用Transwell小室分析上述4组THP-1对于Transwell下室HUVECs的趋化能力.采用SPSS 11.0软件进行统计分析,两组间比较使用独立样本t检验.结果 糖尿病条件下THP-1细胞分泌ICAM-1蛋白表达水平为(202.75±16.49)pg/ml,显著高于阴性对照组[(119.38±6.82)pg/ml],差异有统计学意义(t=8.09,P＜0.01).当利用靶向RIP140的小干扰RNA(siRNA)下调RIP140表达时,RIP140RNAi 组的 ICAM-1 蛋白表达水平为(157.22±19.73)pg/ml,较 RNAi 阴性对照组[(204.59±10.51)pg/ml]明显下降,差异有统计学意义(t=3.67,P＜0.05).4组条件培养基作用于HUVECs细胞,糖尿病条件下HUVECs的ICAM-1蛋白相对于内参甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)表达水平为(0.46±0.06),VCAM-1蛋白相对于内参GAPDH表达水平为(0.87±0.04),均显著高于阴性对照组(分别为0.15±0.02,0.47±0.06),差异均有统计学意义(t值分别为8.30、10.66,P＜0.01).RIP140 RNAi组ICAM-1蛋白相对于内参GAPDH表达水平为(0.17±0.05)及VCAM-1蛋白相对于内参GAPDH表达水平为(0.55±0.06),显著低于RNAi阴性对照组(分别为0.48±0.06,0.91±0.01),差异均有统计学意义(t值分别为7.46,10.99,P＜0.01).Transwell趋化实验显示,糖尿病条件下THP-1细胞趋化数为(6 051±287个/孔),显著高于阴性对照组THP-1细胞趋化数[(1 879±270个/孔)],差异有统计学意义(t=18.30,P＜0.01).RIP140 RNAi组THP-1细胞趋化数为(2 168±280个/孔),显著低于RNAi阴性对照组THP-1细胞趋化数[(5 719±304个/孔)],差异有统计学意义(t=14.88,P＜0.01).结论 糖尿病条件下抑制单核细胞RIP140表达能够减少黏附分子表达并抑制其向血管内皮细胞趋化黏附.
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