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干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)HDS-01甘露聚糖酶基因异源表达及功能验证

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为实现甘露聚糖酶基因异源表达并验证功能,本研究以产甘露聚糖酶的副干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)HDS-01为供试菌株,将基因组序列中功能预测为甘露糖苷酶的基因M1在大肠杆菌中表达,分别以pET-28a和Escherichia coli BL21(DE3)为载体和宿主菌构建M1基因工程菌株,纯化重组蛋白并验证甘露聚糖降解功能.结果表明:重组蛋白M1在表达过程中以包涵体形式存在,经Ni柱亲和层析纯化后,SDS-PAGE显示蛋白为98 kDa,复性后酶活和蛋白浓度分别为19.24±0.55 U/mL和0.51± 0.01 mg/mL.高效液相色谱(High pressure liquid chromatography,HPLC)检测重组蛋白M1降解魔芋粉的产物,反应前3 h,甘露三糖或四糖浓度显著高,此后,甘露糖和甘露二糖浓度逐渐升高.本研究为产甘露聚糖酶乳酸菌直接用于食品级领域奠定了基础,也为乳酸菌甘露聚糖酶蛋白的定向改造提供了依据.
Mannanase Gene in Lactobacillus casei HDS-01:Heterologous Expression and Functional Verification

β-1,4-mannanaseLactobacillus caseiheterologous expressionrecombinant proteinfunctional verification

杨若兮、张鑫、赵丹

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黑龙江大学生命科学学院/农业微生物技术教育部工程研究中心/黑龙江省寒区植物基因与生物发酵重点实验室/黑龙江省普通高校微生物重点实验室,哈尔滨 150080

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β-甘露聚糖酶 干酪乳杆菌 异源表达 重组蛋白 功能验证

国家自然科学基金国家自然科学基金

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2023

中国农学通报
中国农学会

中国农学通报

CSTPCD
影响因子：0.891
ISSN：1000-6850
年,卷(期)：2023.39(32)
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