为研究非复制型弓形虫对小鼠的致病性,利用CRISPR-Cas9技术构建非复制型尿嘧啶营养缺陷型弓形虫(NRTUAs),通过药物和荧光筛选阳性虫株,PCR鉴定,并以噬斑试验鉴定NRTUAs株的表型;将NRTUAs株急性感染小鼠,并以△KU80株处理为感染对照,PBS处理为空白对照,每日记录小鼠的死亡情况,并对各组小鼠器官进行病理组织学观察与分析.结果 表明:1)NRTUAs株对乙胺嘧啶和氯霉素耐药,重组同源臂上下游PCR鉴定均为阳性,内源性基因位点缺失PCR鉴定均为阴性;2)NRTUAs株在舍有尿嘧啶的培养基中能够生长且产生噬斑,在缺乏尿嘧啶的培养基中不能生长且不产生噬斑;3)NRTUAs感染小鼠后,全部存活,且PBS组小鼠的器官组织学形态一致;△KU80组小鼠全部死亡,且两组小鼠器官出现严重病理变化.综上,本研究成功构建非复制型NRTUAs株,该虫株对小鼠无致死性,且小鼠各器官无病理变化,为NRTUAs作为弓形虫疫苗候选株在家畜养殖中的应用奠定理论基础.
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