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枯草芽孢杆菌B111中性蛋白酶基因BS2在毕赤酵母中的表达

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[目的]为开发抗病基因和生物农药新资源,纯化鉴定枯草芽孢杆菌B111分泌的抗棉花黄萎病菌蛋白质,克隆其编码基因,并分析在毕赤酵母中的表达特性.[方法]通过超滤浓缩、90%硫酸铵沉淀、葡聚糖凝胶QAE-A50强阴离子交换柱洗脱及冻干等步骤,分离纯化抗菌蛋白.采用联机反相毛细管柱液相色谱电喷雾串联质谱,鉴定抗菌蛋白种类.克隆包含前导区序列在内的抗菌蛋白基因序列,构建表达载体pPIC9K-PT,转化毕赤酵母GS115.转化子经PCR鉴定,甲醇诱导表达产物经中性蛋白酶活性和抗菌活性检测验证功能. [结果]纯化鉴定了一个来源于枯草芽孢杆菌B111的抗菌中性蛋白酶BS2.克隆了包含前导区序列在内的抗菌蛋白基因BS2,并在毕赤酵母中获得有效表达.重组BS2蛋白分子量约69 kD,表达水平29.77 mg·L-1,水解酪素酶活力27800 U·g-1,并显示抗黄萎病菌活性. [结论]纯化鉴定了一个具有抗菌活性的枯草芽孢杆菌中性蛋白酶BS2,克隆其编码基因BS2,并成功实现在酵母中的有效表达.
Cloning and Expression of a Neutral Protein Gene BS2 from Bacillus subtilis B111 in Pichia pastoris

白玮、张锐、郭三堆

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中国农业科学院生物技术研究所/国家农作物基因资源与基因改良重大科学工程,北京,100081

枯草芽孢杆菌 中性蛋白酶 抗菌活性 毕赤酵母表达

转基因生物新晶种培育科技重大专项基金

2008ZX08005

2009

10.3864./j.issn.0578-1752.2009.03.015

中国农业科学
中国农业科学院

中国农业科学

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：1.899
ISSN：0578-1752
年,卷(期)：2009.42(3)
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