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茶树CsHIPP26.1互作蛋白的筛选与验证

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[背景]'黄金芽'属于光照敏感型黄化茶树(Camellia sinensis)品种，叶片色泽呈现强光黄化、弱光复绿的特点，但叶色响应光照的黄化机制并不明确。前期通过对黄化叶片、遮阴复绿叶片以及常绿品种叶片的蛋白组研究发现，重金属相关异戊二烯化植物蛋白CsHIPP26。1(TEA000549)的表达响应光照强度，表明CsHIPP26。1可能参与调控'黄金芽'叶色黄化的光响应过程。[目的]通过筛选与CsHIPP26。1互作的光信号响应相关的蛋白，为叶片色泽响应光照信号变化提供科学依据。[方法]以'黄金芽'茶树1芽2叶为材料进行CsHIPP26。1和互作基因的克隆，经酵母双杂交筛库，然后将筛选得到的目的蛋白进行酵母双杂交点对点验证、体内双分子荧光互补(BiFC)和体外pull-down等技术进行蛋白互作的进一步验证。[结果]通过酵母双杂交对茶树cDNA文库进行筛选，共筛选到26个候选互作蛋白，主要集中在细胞组分、结合以及催化活性方面发挥作用，其中生物素合成代谢过程富集程度较高，与光信号通路及叶绿素合成相关的蛋白只有编号为TEA026466。1的bHLH30转录因子。克隆bHLH30转录因子后发现，该转录因子与茶树光信号传导途径蛋白PIF4处于同一进化树分支，且含有与茶树PIF4蛋白相同的HLH和ACT结构域，将该bHLH30转录因子命名为CsPIF4。2，GenBank登记号为MW116834。进一步通过体外Pull-down蛋白互作和体内双分子荧光互补(BiFC)验证发现，CsHIPP26。1和CsPIF4。2蛋白能够发生互作，并且发生互作的部位在细胞核内。[结论]初步筛选出26个与CsHIPP26。1互作的蛋白，并验证发现CsHIPP26。1能够在细胞核内与其中一个光敏色素互作因子CsPIF4。2发生蛋白相互作用。
Screening and Verification of CsHIPP26.1 Interaction Protein in Tea Plant

范延艮、王域、刘富浩、赵秀秀、向勤锃、张丽霞

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山东农业大学园艺科学与工程学院/作物生物学国家重点实验室,山东泰安271018

HIPP PIF4 蛋白互作 黄化品种 光响应

山东省现代农业产业技术体系创新团队项目山东省双一流奖补资金项目鲁渝科技协作计划

SDAIT-19-05SYL2017YY032020LYXZ005

2022

10.3864/j.issn.0578-1752.2022.08.013

中国农业科学
中国农业科学院

中国农业科学

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：1.899
ISSN：0578-1752
年,卷(期)：2022.55(8)
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