[目的]糜子(Panicum miliaceum L.)作为一种古老的粟类作物,种质丰富,基于荧光SSR标记构建其DNA分子身份证可为资源的数字化管理提供理论依据和分子检测工具.[方法]以235份中国糜子核心种质为试验材料,对山西农业大学农学院糜子作物分子育种课题组前期开发的糜子特异性SSR标记进行多次PCR筛选和优化后获取核心引物.基于糜子参考基因组信息,经过BLAST序列比对后将核心标记进行染色体定位.在SSR引物的5'端标注荧光(FAM/HEX),利用毛细管电泳给出材料的基因型,采用"0,1"二进制编码方式记录扩增条带的有无,使用ID Analysis 4.0检测材料的区分程度.采用十进制(0-9)统计扩增片段大小以获得材料的字符串分子身份证.使用Popgene、Powermarker、MEGA、NTSYS进行遗传多样性、遗传聚类和主成分分析.利用二维码在线软件(https://cli.im/)给出材料的二维码DNA分子身份证.[结果]PCR扩增结果发现,7个荧光SSR(RYW3、RYW6、RYW11、RYW18、RYW37、RYW43和RYW125)组合在一起可以将235份材料全部区分开.BLAST结果表明,RYW18、RYW37分布在第2染色体,分别位于0.60和0.80 cM处;RYW125位于第4染色体,定位在10.40 cM处;RYW43、RYW6分布在第5染色体,分别位于52.80和53.00 cM处;RYW11和RYW3定位在第6染色体,分别位于2.10和20.70cM处.遗传多样性分析结果表明,235份材料在7个位点共检出87个等位变异,每个位点检出3(RYW11)-25(RYW6)个,平均为 12.4286;检出 Shannon 多样性指数(I)变幅为 0.2055(RYW18)-2.0587(RYW6),平均 1.1398;观测杂合度(Ho)为 0.0086(RYW11)-0.9455(RYW18);期望观测杂合度(He)为 0.0795(RYW18)-0.7452(RYW6);Nei's基因多样性指数(Nei)为 0.0793(RYW18)-0.7452(RYW6);多态性信息含量(PIC)为 0.0334(RYW11)-0.8071(RYW6),平均为0.5185.聚类分析和主成分分析均将材料划归8个类群.将电泳条带进行数字编码,利用7个标记组合,构建了全部材料的字符串和二维码DNA分子身份证.[结论]以235份中国糜子核心种质为试验材料,利用PCR扩增和毛细管电泳筛选到7个糜子荧光SSR核心标记.基于糜子参考基因组信息将上述标记定位在4条染色体上.利用上述标记扩增供试材料,给出遗传多样性衡量参数,基于遗传距离将材料聚为8个类群,主成分分析解决了聚类结果中出现的偏差.依照最少引物区分最多种质的原则,利用十进制编码方式给出材料的字符串DNA分子身份证,结合表型数据,利用二维码在线软件构建了全部材料的二维码DNA分子身份证.
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