摘要
背景 清热消癥方对糖尿病肾病(DKD)肾损伤有保护作用,然而机制尚不十分明确.目的 探讨清热消癥方在单侧肾切除联合链脲佐菌素(STZ)诱导的DKD大鼠肾损伤中的保护作用及机制.方法 2019年7—11月,将30只SPF级健康雄性SD大鼠随机分为假手术组(NC组,n=10)和模型组(n=20).NC组大鼠于右肾体表解剖位置做1 cm的横行切口并缝合;模型组大鼠予右侧肾切除.1周后,大鼠伤口愈合后,NC组大鼠给予等量柠檬酸缓冲液腹腔注射;模型组大鼠予单次腹腔注射STZ(55 mg/kg)的方法构建DKD模型.成模后将模型组大鼠随机分为DKD亚组(n=10)和清热消癥方亚组(QRXZF亚组,n=10).NC组和DKD亚组大鼠灌服等量(1 ml/100 g)0.9％氯化钠溶液,1次/d.QRXZF亚组大鼠以7.92 g·kg-1·d-1的剂量予中药灌胃.干预期间每周对大鼠称重.干预16周后留取大鼠24 h尿、血清、肾组织标本,并称取肾脏重量,计算肾重指数.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠24 h尿微量白蛋白(24 hUpro)水平,全自动生化分析仪检测大鼠血肌酐(Scr)、血清尿素氮(BUN)和血清白蛋白(ALB).将肾脏组织进行苏木素-伊红(HE)染色、糖原(PAS)染色、Masson染色,观察大鼠肾脏组织损伤程度.免疫组化法(IHC)检测各组大鼠肾组织Caspase-3和p16表达情况.原位末端脱氧核苷酸转移酶标记技术(TUNEL)法检测肾小管细胞凋亡率.结果 DKD亚组、QRXZF亚组体质量均低于NC组、肾重指数均高于NC组(P<0.01);QRXZF亚组体质量高于DKD亚组、肾重指数低于DKD亚组(P<0.01).DKD亚组24 hUpro、Scr、BUN水平均高于NC组,ALB水平低于NC组(P<0.01);QRXZF亚组24 hUpro、BUN水平均高于NC组,ALB水平低于NC组(P<0.01);QRXZF亚组24 hUpro、Scr、BUN水平均低于DKD亚组,ALB水平高于DKD亚组(P<0.01).与NC组相比,DKD亚组和QRXZF亚组大鼠肾脏均出现明显病理损伤,肾小球肥大和间质小管纤维化,但QRXZF亚组病变程度较DKD亚组明显减轻.免疫组化结果表明,DKD亚组、QRXZF亚组肾组织p16、Caspase-3表达水平均高于NC组,QRXZF亚组肾组织p16、Caspase-3表达水平均低于DKD亚组(P<0.01).DKD亚组、QRXZF亚组大鼠肾小管细胞凋亡率高于NC组,QRXZF亚组肾小管细胞凋亡率低于DKD亚组(P<0.01).结论 清热消癥方可有效改善DKD大鼠的肾功能,抑制肾脏病理损伤和纤维化,抑制DKD大鼠肾组织中Caspase-3和p16的表达,降低肾小管细胞凋亡率.提示清热消癥方发挥肾保护作用的机制可能与抑制肾脏细胞衰老和凋亡有关.
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