摘要
以奶牛乳腺组织和正常生长的奶牛乳腺上皮细胞为研究对象,通过使用qRT-PCR检测青春期、泌乳期和退化期奶牛乳腺组织中14-3-3β(tyrosine 3-monooxygenase/tryptophan 5-monooxygenase activation protein beta)、eIF2α(eukaryotic translation initiation factor 2 subunit alpha)和ATF4(activating transcription factor 4)的mRNA表达水平以及Western Blot检测14-3-3β、p-eIF2α和ATF4的蛋白表达水平.结果表明,在泌乳期的奶牛乳腺组织中14-3-3β蛋白表达水平最低,而p-eIF2α蛋白表达水平最高.运用RNAi技术将乳腺上皮细胞中14-3-3β基因敲除,用毒胡萝卜素(TG,Thapsigargin)诱导细胞内质网应激,检测14-3-3β、eIF2α、ATF4、CHOP(DNA damage inducible transcript 3)、Caspase-3的mRNA表达水平的变化,同时检测β-酪蛋白的mRNA和蛋白水平的表达变化,以及用甘油三酯检测试剂盒和MTT细胞增殖检测试剂盒检测奶牛乳腺上皮细胞的乳脂含量、增殖情况的变化.结果表明,在14-3-3β敲除之后,eIF2α、ATF4、CHOP和Caspase-3的mRNA表达水平显著升高,而β-casein的mRNA和蛋白表达水平都显著降低,同时乳脂含量和细胞增殖率也显著下降.揭示14-3-3β参与奶牛乳腺上皮细胞内质网应激关键因子eIF2α和ATF4的调控并调节泌乳效应,进一步完善了14-3-3β与泌乳调控和内质网应激有关的分子机制.
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