中国乳品工业2022，Vol.50Issue(8) ：48-52,57.DOI:10.19827/j.issn1001-2230.2022.08.009

PMA-RF-SRCA检测乳中单增李斯特氏菌活菌

Detection of Live Listeria Monocytogenes in Milk by Real-time Fluorescence Saltatory Rolling Circle Amplification Combined with Propidium Monoazide

王新潮 张蕴哲 杨倩 卢鑫 徐慧 张伟
中国乳品工业2022，Vol.50Issue(8) ：48-52,57.DOI:10.19827/j.issn1001-2230.2022.08.009
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PMA-RF-SRCA检测乳中单增李斯特氏菌活菌

Detection of Live Listeria Monocytogenes in Milk by Real-time Fluorescence Saltatory Rolling Circle Amplification Combined with Propidium Monoazide

王新潮 1张蕴哲 1杨倩 2卢鑫 3徐慧 3张伟4
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作者信息

  • 1. 河北农业大学食品科技学院 河北 保定071001
  • 2. 河北农业大学食品科技学院 河北 保定071001;河北大学公共卫生学院 河北 保定071002
  • 3. 河北农业大学理工学院 河北 沧州061100
  • 4. 河北农业大学食品科技学院 河北 保定071001;河北农业大学生命科学学院 河北 保定071001;河北省人畜共患病原微生物分析与防控重点实验室 河北 保定071001
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摘要

本研究建立了一种叠氮溴化丙锭(PMA)与实时荧光跨越式滚环等温扩增(RF-SRCA)相结合的方法,可以高效灵敏检测乳中活的单增李斯特氏菌.以hlyA基因为靶点,设计并筛选出特异性引物,通过对PMA的工作浓度、暗孵育时间和光反应时间进行优化,确定了最佳的处理条件.此外,对该方法的特异性、灵敏度及检出限进行了分析.结果表明,该方法引物特异性良好,6株单增李斯特氏菌结果均为阳性,12株非单增李斯特氏菌结果均为阴性;当PMA工作浓度为30 μmol/L、暗孵育10 min、光反应15 min时,所建立的方法灵敏度为3.9 CFU/mL,人工污染乳制品的检出限为1.56×10 CFU/mL.综上所述,本研究所建立的PMA-RF-SRCA方法特异性强,灵敏度高,为检测食品中活的单增李斯特氏菌提供了新的思路.

关键词

跨越式滚环等温扩增(SRCA)/叠氮溴化丙锭(PMA)/单增李斯特氏菌/hlyA基因/乳品

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基金项目

国家基金面上项目(32172288)

国家基金面上项目(31371772)

河北省自然科学基金重点项目(C2019204342)

河北省高等学校科学技术研究项目(QN2022073)

河北省人才引进计划(360-0803-JSN-3YGS)

中央引导地方科技发展资金项目-基础研究项目(216Z5501G)

河北农业大学食品加工学科群经费项目(2021-06)

河北大学高层次人才科研启动项目(521100222024)

出版年

2022
中国乳品工业
黑龙江乳品工业技术开发中心,中国乳制品工业协会

中国乳品工业

CSTPCD北大核心
影响因子：0.41
ISSN：1001-2230
被引量3
参考文献量7
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