摘要
microRNAs(miRNAs)是一类在生物基因组中存在的经典的非编码蛋白的内源性RNA基因(non-coding RNAs,ncRNA),本实验将以健康的处于泌乳期的中国荷斯坦奶牛乳腺上皮细胞(Dairy cow mammary epithelial cells,DCMECs)为细胞模型,探究bta-miR-182对DCMECs中乳糖合成的调节作用.首先通过在线生物学信息网站预测miR-182与编码细胞上葡萄糖转运关键蛋白GLUT1的基因SLC2A1可能存在靶向结合关系,并通过双荧光素酶实验进行验证.其次采用脂质体转染技术体外瞬时转染miR-182 mimics进入DCMECs中,通过实时荧光定量PCR及western blotting技术,检测SLC2A1基因表达及GLUT1蛋白表达水平的变化.再收集细胞培养上清液,通过牛乳糖酶联检测试剂盒检测奶牛乳腺上皮细胞中乳糖含量水平的变化.实验结果显示miR-182对奶牛乳腺上皮细胞中的乳糖的合成有明显影响作用,即miR-182对SLC2A1的表达具有明显的靶向负调控作用,且对DCMECs中乳糖的合成具有显著抑制作用,说明miR-182通过靶向调节SLC2A1的表达对奶牛乳腺上皮细胞中乳糖的合成进行负调控.
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