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18S rRNA基因巢式PCR-RFLP分析两株牛源隐孢子虫分离株

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目的 18S rRNA巢式聚合酶链反应(Nested PCR)-限制片段长度多态性(restriction fragment length polymorphism,RFLP)鉴定上海(简称SH-BOV)和徐州(简称XZ-BOV)两株牛源隐孢子虫.方法 改良-抗酸染色确定感染隐孢子虫的上海株和徐州株牛粪,提取DNA后经18S rRNA基因巢式PCR扩增,扩增产物测序后用Blast和MEGA软件进行同源性和系统发育分析.同时扩增产物分别用SspⅠ和VspⅠ单酶切,且XZ-BOV扩增产物用DdeⅠ酶切后进行RFLP分析.结果 通过18S rRNA基因分析,SH-BOV与1株巴西牛隐孢子虫Cryptospridium bovis同源性为100%,种系发育树上两者在同一分支;XZ-BOV与安氏隐孢子虫C. andersoni同源性为99%,种系发育树上两者在同一分支.扩增产物分别用SspⅠ和VspⅠ单酶切后,可鉴别出SH-BOV为C. bovis,XZ-BOV为C. andersoni或C. muris.XZ-BOV扩增产物用DdeⅠ酶切后可鉴别出XZ-BOV为C. andersoni.结论 上海株牛源隐孢子虫(SH-BOV)鉴定为牛隐孢子虫(C. bovis),徐州株牛源隐孢子虫(XZ-BOV)鉴定为安氏隐孢子虫(C. andersoni).
Isolation of two strains of Cryptosporidium from bovines by 18S rRNA gene nested PCR-RFLP

刘晖、袁忠英、沈玉娟、冯耀宇、曹建平

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遵义医学院寄生虫学教研室,遵义,563003

中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所,卫生部寄生虫病原与媒介生物学重点实验室,世界卫生组织疟疾、血吸虫病和丝虫病合作中心,上海,200025

华东理工大学资源与环境工程学院,上海,200237

牛隐孢子虫 安氏隐孢子虫 18S rRNA基因 巢式 PCR-RFLP

卫生行业科研专项项目国家科技攻关项目

2008020122003BA712A03-06

2009

中国人兽共患病学报
中国微生物学会

中国人兽共患病学报

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：0.814
ISSN：1002-2694
年,卷(期)：2009.25(2)
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