摘要
目的 从轮状病毒阳性的牛粪便标本中,分离出一株G6P[1]型牛轮状病毒(Bovine Rotavirus,BRV),对其进行培养和鉴定.方法 用PBS溶液重悬粪便标本并离心,将其上清过滤除菌和胰酶处理后,利用MA104细胞进行分离培养;通过逆转录-聚合酶链式反应(Reverse Transcription-polymerase Chain Reaction,RT-PCR)对样本VP4和VP7基因进行扩增和测序,与GenBank上的参考序列进行同源性分析,构建进化树,分析确定其G/P基因分型.通过聚丙烯酰胺凝胶电泳法(Polyacryl-amine Gel Electrophoresis,PAGE)、噬斑实验和电镜(Transmission Electron Microscope,TEM)等技术对分离到的病毒进行鉴定和纯化.绘制病毒生长动力学曲线.结果 分离培养了1株BRV毒株,将其命名BLL.VP7和VP4基因测序结果显示此毒株为G6P[1]型轮状病毒.PAGE胶结果显示分离株电泳型为长型,条带呈现A组轮状病毒排列电泳图谱;通过噬斑实验将毒株进行了纯化.电镜检测到典型的轮状病毒颗粒.病毒生长动力学曲线可发现病毒在感染后6h已经开始复制.结论 本研究成功分离到G6 P[1]型牛型轮状病毒,为研究G6 P[1]型轮状病毒的病原学特征提供实验基础和技术参考.
维普
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