中国人兽共患病学报2024，Vol.40Issue(2) ：140-146.DOI:10.3969/j.issn.1002-2694.2024.00.020

利用反向遗传技术产生表达外源基因的重组SA11轮状病毒

Production of recombinant SA11 rotavirus expressing exogenous genes through reverse genetic technology

柴萨萨 蔡昊 刘夏飞 赵静 宋敬东 李金松 裴银辉 李利利 段招军
中国人兽共患病学报2024，Vol.40Issue(2) ：140-146.DOI:10.3969/j.issn.1002-2694.2024.00.020
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利用反向遗传技术产生表达外源基因的重组SA11轮状病毒

Production of recombinant SA11 rotavirus expressing exogenous genes through reverse genetic technology

柴萨萨 1蔡昊 2刘夏飞 3赵静 2宋敬东 3李金松 3裴银辉 4李利利 3段招军3
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作者信息

  • 1. 华北理工大学基础医学院河北省慢性疾病基础医学重点实验室,唐山 063000;中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所,国家卫生健康委员会医学病毒和病毒病重点实验室,北京102206
  • 2. 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所,国家卫生健康委员会医学病毒和病毒病重点实验室,北京102206;甘肃中医药大学公共卫生学院,兰州 730000
  • 3. 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所,国家卫生健康委员会医学病毒和病毒病重点实验室,北京102206
  • 4. 华北理工大学基础医学院河北省慢性疾病基础医学重点实验室,唐山 063000
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摘要

目的 利用反向遗传技术产生NSP1基因插入和表达外源基因的重组SA11轮状病毒,构建可表达外源基因的轮状病毒载体.方法 本研究将轮状病毒SA11株的NSP1基因片段的223位(5端)至1388位的核苷酸删除,并直接插入连接了终止-再启动元件(P2A)的增强绿色荧光蛋白(EGFP)基因,采用已建立的"12质粒"轮状病毒反向遗传系统拯救NSP1基因插入和表达EGFP的重组SA11轮状病毒.通过观察细胞病变效应和插入基因(EGFP)的荧光表达初步确定重组病毒的成功拯救,再结合电镜的形态学观察、RT-PCR的测序结果及病毒基因组的检测结果,进一步证明重组轮状病毒的成功拯救和传代扩增.利用TCID50法和qRT-PCR法,测定了rSA11和rSA11/NSP1-EGFP的病毒滴度并绘制了基因组复制动力曲线.结果 基于"12质粒系统"成功拯救了重组轮状病毒rSA11/NSP1-EGFP,证明NSP1片段截短并插入外源基因后病毒仍可正常复制,且具有良好的遗传稳定性,但病毒滴度低于其亲本株.结论 基于NSP1基因插入和表达EGFP的重组轮状病毒能够实现稳定遗传,为利用反向遗传学构建表达外源基因的轮状病毒载体的深入探索提供了基础.

关键词

A组轮状病毒/反向遗传/外源基因/NSP1基因

Key words

Group A Rotavirus/reverse genetics/foreign gene/NSP1 gene

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基金项目

国家重点研发计划(2021YFC2301000)

出版年

2024
中国人兽共患病学报
中国微生物学会

中国人兽共患病学报

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：0.814
ISSN：1002-2694
参考文献量21
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