摘要
从中国珍稀毒蛛种虎纹捕鸟蛛(Selenocosmia huwena )毒腺中分离纯化的虎纹捕鸟蛛毒素-Ⅰ (Huwentoxin Ⅰ,HWTX-Ⅰ),其一级结构、二级结构和溶液构象均已阐明,生理功能实验已证实HWTX-Ⅰ是一种作用于突触前膜的神经毒素和高阈值钙通道抑制剂.为深入开展对HWTX-Ⅰ的应用研究,根据HWTX-Ⅰ多肽氨基酸序列,设计其N-端、C-端和中间段3组简并引物(引物Ⅰ、引物Ⅱ和引物Ⅲ).从虎纹捕鸟蛛毒腺提取制备mRNA,逆转录合成cDNA.以引物Ⅰ和引物Ⅱ为引物,采用PCR方法对虎纹捕鸟蛛毒腺总cDNA进行简并引物扩增,得到两条相对特异性的DNA片段,产物直接与PCR克隆载体pUC-T连接.重组子经原引物再次PCR扩增和同位素标记引物Ⅲ进行Southern分子杂交鉴定.对4个重组子测序结果表明,有1个重组子所对应的氨基酸顺序与HWTX-I一致,GenBank数据检索说明HWTX-I cDNA编码序列确实是一个从未报道的序列.本研究结果为HWTX-Ⅰ在真核细胞表达,大量获取蜘蛛毒素组分奠定了基础.
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