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白介素-1受体1胞外域的原核表达及鉴定

Prokaryotic expression and identification of extracellular domain of interleukin-1 receptor 1

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目的 原核表达白介素-1受体1(interleukin-1 receptor 1,IL-1R1)胞外域,并进行鉴定.方法 从A375·S2细胞中扩增IL-1R1胞外域基因片段,克隆至载体pET-28a中,构建重组表达质粒pET-28a-IL-1R1,转化入感受态OverExpress(DE3),经IPTG诱导表达,并进行亲和层析纯化.将纯化产物与弗氏佐剂充分乳化,免疫小鼠,分离血清,ELISA法检测血清抗体效价,Western blot和间接免疫荧光法检测抗体结合活性.结果 菌落PCR及测序结果证明,重组表达质粒pET-28a-IL-1R1构建正确.表达产物的相对分子质量约34000,表达量为18％,纯化后纯度达93％,且可与鼠抗His标签单克隆抗体发生特异性结合.免疫小鼠血清效价约达1:100000,且可与重组IL-1R1蛋白及A375·S2细胞中受体蛋白发生特异性结合.结论 成功原核表达了IL-1R1胞外域,且免疫小鼠后可产生IL-1R1特异性抗体,本实验为后续IL-1R1单克隆抗体的制备及细胞受体功能的研究奠定了基础.

周永飞、韩顺子、赵丹莹、张健锋、常军亮、刘玉林、曹玉锋、刘景会

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白介素-1受体1 胞外域 原核表达 纯化 多克隆抗体

吉林省科技发展计划

20160204034YY

2021

中国生物制品学杂志
中华预防医学会,长春生物制品研究所有限责任公司

中国生物制品学杂志

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：0.417
ISSN：1004-5503
年,卷(期)：2021.34(12)
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