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葫芦素B调控糖酵解抑制HuCCT1细胞增殖的作用机制

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目的:探究葫芦素B(CuB)抑制细胞增殖和糖酵解的作用机制。方法:采用细胞增殖与活性检测-8(CCK-8)法检测CuB(0、40、80、120、160、200、400、800 nmol·L-1)对HuCCT1细胞增殖的影响;采用平板克隆实验检测CuB(50、100、200 nmol·L-1)对HuCCT1细胞集落形成能力的影响;采用流式细胞术检测CuB(50、100、200 nmol·L-1)对HuCCT1细胞周期的影响;采用可见分光光度法检测CuB(50、100、200nmol·L-1)给药后HuCCT1细胞中糖酵解关键酶己糖激酶(HK)、丙酮酸激酶(PK)活性，及葡萄糖消耗量、乳酸生成量和三磷酸腺苷(ATP)生成量的变化;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测CuB对细胞周期相关蛋白、增殖相关蛋白、糖酵解关键蛋白及蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(Akt/mTOR)通路相关蛋白表达情况的影响。结果:与空白组比较，给药24h，160～800nmol·L-1CuB，给药48h后80～800nmol·L-1可以抑制HuCCT1细胞增殖(P＜0。05，P＜0。01)，并呈时间和浓度依赖性，给药48 h半数抑制浓度为200 nmol·L-1;CuB可以呈浓度依赖性的抑制HuCCT1细胞集落形成能力(P＜0。01);CuB能够将HuCCT1细胞周期阻滞在G2期(P＜0。05，P＜0。01);CuB(100、200nmo1·L-1)可以抑制糖酵解关键酶HK、PK的活性，并降低细胞葡萄糖消耗量及乳酸和ATP的生成量(P＜0。05，P＜0。01)。Western blot结果显示，CuB(100、200 nmol·L-1)可以抑制周期相关蛋白CyclinB1、增殖细胞核抗原(PCNA)、己糖激酶1(HK1)、己糖激酶2(HK2)、丙酮酸激酶1(PKM1)、丙酮酸激酶2(PKM2)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、磷酸化mTOR(p-mTOR)及磷酸化核糖体蛋白(p-RPS6)的蛋白表达水平(P＜0。05，P＜0。01)。结论:CuB可能通过调控Akt/mTOR通路抑制HuCCT1细胞糖酵解进而影响细胞增殖。
Mechanism of Cucurbitacin B in Regulating Glycolysis and Inhibiting Proliferation of HuCCT1 Cells

李励、邓冬杰、谈相云、孙懿、王楚婷、郑国华、胡俊杰

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湖北中医药大学药学院,武汉430065

湖北中医药大学中药资源与中药复方教育部重点实验室,武汉430065

葫芦素B 肝内胆管癌 蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(Akt/mTOR)通路 糖酵解 HuCCT1细胞增殖

湖北省教育厅科学研究重点项目

D20202004

2022

10.13422/j.cnki.syfjx.20221624

中国实验方剂学杂志
中国中医科学院中药研究所　中国中西医结合学会中药专业委员会

中国实验方剂学杂志

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：1.62
ISSN：1005-9903
年,卷(期)：2022.28(16)
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