摘要
目的:观察丹参注射液对血小板(PLT)诱导的乳腺癌细胞体外转移作用.方法:采用噻唑蓝(MTT)比色法观察丹参注射液对MDA-MB-231细胞体外生长的影响;采用Oris™体外迁移试剂盒检测丹参注射液(终质量浓度分别为4、8、16 g·L-1)对PLT(1.5×1010个/L)诱导的乳腺癌细胞体外迁移的影响;采用Transwell小室法检测丹参注射液对PLT诱导的细胞侵袭的影响;采用细胞免疫荧光法和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测丹参注射液对PLT诱导的上皮间质转化(EMT)关键性转录因子Slug、Snail蛋白表达的影响;采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测丹参注射液(终质量浓度为4、8、16、32、64 g·L-1)对转化生长因子-β1(TGF-β1)分泌的影响;采用Western blot观察丹参注射液对PLT诱导MDA-MB-231细胞Podoplain(PDPN)蛋白表达的影响.结果:与空白组比较,丹参注射液组(32、64g·L-1)细胞的吸光度A570均明显降低(P＜0.05,P＜0.01);丹参注射液组(4、8、16 g·L-1)A570差异无统计学意义.与空白组比较,PLT组迁移、侵袭细胞数明显增加,丹参注射液各组则可明显抑制PLT诱导的细胞迁移和侵袭.与空白组比较,PLT组细胞E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达明显降低,丹参注射液可明显逆转PLT的这一作用.与空白组比较,PLT组Slug、Snail蛋白表达明显升高(P＜0.05,P＜0.01),丹参注射液则明显逆转PLT诱导的Snail蛋白表达(P＜0.05,P＜0.01);PLT组TGF-β1含量显著升高(P＜0.01),丹参注射液组(16、32、64g·L-1)可明显降低PLT诱导的TGF-β1分泌(P＜0.05,P＜0.01),其余丹参注射液组对TGF-β1分泌无明显影响;PLT组细胞PDPN蛋白表达显著升高(P＜0.01),丹参注射液可显著抑制PLT诱导的PDPN表达升高(P＜0.01).结论:丹参注射液可抑制PLT诱导的乳腺癌细胞的迁移、侵袭和EMT作用,其机制可能是通过下调乳腺癌细胞PDPN表达、干扰PLT与肿瘤细胞之间直接作用与PLT分泌TGF-β1作用无关.
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