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鸡毒支原体P31蛋白原核表达及膜定位鉴定

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为筛选鸡毒支原体(MG)膜蛋白,利用生物信息学软件对其进行序列分析后,选择不含跨膜区的714 bp基因片段作为靶标蛋白进行原核表达(因其分子量约31 kDa,故而命名为P31蛋白),表达P31蛋白并进行纯化后制备兔多克隆抗体,运用ELISA方法检测抗体效价,提取MG液体培养物总蛋白、胞浆蛋白、膜蛋白,利用Western blot进行亚细胞定位.结果显示,P31蛋白具有跨膜结构和良好的B细胞抗原表位,原核表达后获取融合蛋白rP31,大小约为31 kDa,ELISA检测兔血清效价为1∶25 600,Western blot分析显示,rP31蛋白分布在MG膜表面.本研究证实了P31蛋白确为MG膜蛋白且抗原性良好,可做为研发MG新型诊断方法、基因工程疫苗及治疗药物的候选蛋白.
Prokaryotic Expression and Membrane Localization of Mycoplasma gallisepticum P31 Protein
In order to investigate the function of Mycoplasma gallisepticum(MG)membrane protein,the transmembrane area 714 bp was analyzed using bioinformatics software and for prokaryotic expression of a target protein with molecular weight about 31 kDa.The expressed recombinant P31 protein was purified and used for preparation of rabbit polyclonal antibodies.The rabbit polyclonal antibodies were titrated to be 1:25 600 by ELISA.The P31 protein was distributed on the surface of MG membrane as visualized in Western blot.In this study,P31 protein was confirmed to be a MG membrane protein with good antigenicity,which could be used as a candidate protein for developing novel MG diagnostic methods,genetic engineering vaccines and therapeutic drugs.

Mycoplasma gallisepticumP31 proteinprokaryotic expressionlocalization

李梅、杨美、岳筠、王柏林、宋春、朱二鹏、单春兰、文明、程振涛

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贵州大学动物科学学院,贵阳 550025

贵州省动物疫病预防控制中心,贵阳 550008

贵州省动物疫病与兽医公共卫生重点实验室,贵阳 550025

鸡毒支原体 P31蛋白 原核表达 膜定位

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3206078631660723黔科合基础[2019]1181号黔科合支撑[2021]一般161黔科合平台人才[2021]5646

2024

中国动物传染病学报
中国农业科学院上海兽医研究所

中国动物传染病学报

CSTPCD北大核心
影响因子:0.651
ISSN:1674-6422
年,卷(期):2024.32(4)
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