期刊,中国动物传染病学报 2024年卷4期_国家学术搜索

期刊信息/Journal information

中国动物传染病学报

中国农业科学院上海兽医研究所

主办单位：中国农业科学院上海兽医研究所

主　　编：黄光志

出版周期：双月刊

国际刊号：1674-6422

电子邮箱：bianjibu@shvri.ac.cn

电　　话：021-34293142

邮政编码：200241

地　　址：上海市闵行区紫月路518号

中国动物传染病学报/Journal Chinese Journal of Veterinary Parasitology北大核心CSTPCD

查看更多>>本刊是由农业部中国农科院上海家畜寄生虫病研究所主办，农业部农业预防办公室协办的全国唯一的兽医寄生虫学专业杂志。

正式出版

收录年代

柔嫩艾美耳球虫棒状体颈部蛋白EtRON2L2特性与功能初步分析

刘曼玉朱顺海赵其平贾刘数...

1-10页

查看更多>>摘要：利用RT-PCR、间接免疫荧光实验、免疫印迹实验、抗体中和实验以及BiFC等方法对柔嫩艾美耳球虫棒状体颈部蛋白2同源分子—EtRON2L2的特性和功能进行研究。结果发现EtRON2L2氨基酸序列与常规的EtRON2仅有26。63%的同源性，mRNA水平在第二代裂殖子中最高，而蛋白水平在第二代裂殖子和子孢子阶段最高;EtRON2L2在游离的第二代裂殖子和子孢子阶段主要分布于胞质，而在入侵后子孢子中主要分布于虫体表面;抗rEtRON2L2多克隆血清处理组明显抑制子孢子入侵细胞;EtRON2L2与EtAMA3之间存在互作关系。本研究为探究EtRON2L2在球虫入侵过程中的作用机制奠定基础。

关键词：

柔嫩艾美耳球虫棒状体颈部蛋白2相互作用

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万方数据

IL-12在RSV感染小鼠气道重塑中的作用机制分析

陶双董善武

11-16页

查看更多>>摘要：为探究白细胞介素12(interleukin 12，IL-12)在呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus，RSV)感染小鼠气道重塑中的作用机制。体外培养大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)，经RSV感染后观测细胞中IL-12表达的释放规律。采用滴鼻法建立RSV感染模型，观察IL-12 P40基因敲除[IL-12 P40(-/-)]小鼠肺组织病理改变、BALF中Th1/Th2细胞因子、肺组织信号转导和转录激活因子4(signal transducer and activator of transcriptional，STAT4)及气道重塑标记物表达的变化。感染3、12、24 h，感染组IL-12水平均低于对照组(P＜0。05)。IL-12 P40(-/-)小鼠淋巴细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞数、IL-5、IL-13、气道炎症病理评分、ColⅠ、FN-1和α-SMA表达水平高于野生型，巨噬细胞数、IL-12、IFN-γ和p-STAT4/STAT4水平低于野生型(P＜0。05)。RSV感染诱导AECⅡ细胞和野生型小鼠IL-12水平下调，IL-12缺乏可加重RSV小鼠气道炎症和气道重塑，可能与抑制STAT4活化有关。

关键词：

呼吸道合胞病毒白细胞介素12气道炎症转录激活因子4气道重塑

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万方数据

基于CRISPR/Cas9技术的全基因组基因编辑MDCK细胞文库的构建

朱媛媛许榜丰闫鸣昊刘芹防...

17-24页

查看更多>>摘要：本研究利用CRISPR/Cas9基因编辑技术，首先靶向犬全基因组设计合成转录sgRNA的DNA文库，并将DNA文库全部克隆于lentiCRISPR v2慢病毒转移载体上，高通量测序结果显示文库覆盖度高、均一性良好。将质粒文库和慢病毒包装系统质粒共转染293T细胞，收取含慢病毒样病毒的上清液感染MDCK细胞，在最适浓度嘌呤霉素筛选下，收集嘌呤霉素抗性细胞，冻存于-80℃，提取一部分细胞的基因组，通过PCR扩增转录sgRNA的DNA，将PCR产物插入到T载体后，挑取单克隆菌落，测序表明细胞文库中转录的sgRNA具有较好的覆盖度。本实验成功构建了犬全基因组范围转录sgRNA的质粒文库，并成功构建了MDCK细胞全基因组范围的基因编辑细胞库，该文库可作为后续筛选病毒复制关键宿主因子的细胞平台。

关键词：

CRISPR/Cas9MDCK细胞系全基因组基因编辑

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万方数据

一种诱导表达绿色荧光蛋白穿梭质粒的构建及其在荧光示踪中的应用

左东李子晨尹伊胡海...

25-31页

查看更多>>摘要：细菌的荧光标记是一种重要的常用实验标记技术，用于研究细菌生理生化特性、感染宿主体内示踪、感染细胞示踪等研究。细菌的荧光标记通常通过质粒表达荧光蛋白来实现，而不同类型的细菌，由于菌种特性不同，构建的质粒往往不能通用。本研究构建了一种可诱导表达增强型绿色荧光蛋白的穿梭质粒pBT-iEGFP，该质粒可通过添加无水四环素诱导表达绿色荧光蛋白。诱导表达和传代稳定性试验表明，pBT-iEGFP质粒可在禽致病性大肠杆菌、鼠伤寒沙门菌和马耳他布鲁菌中成功诱导表达绿色荧光蛋白，在五代盲传中该质粒能在细菌中稳定遗传。胞内布鲁菌诱导表达试验证实，pBT-iEGFP质粒可成功示踪细胞感染过程中活的布鲁菌。总之，本研究构建的pBT-iEGFP质粒可作为细菌的荧光示踪研究工具，应用于多种实验研究。

关键词：

诱导表达质粒绿色荧光蛋白大肠杆菌沙门菌布鲁菌

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宿主蛋白Rab11a对牛病毒性腹泻病毒复制的影响

权冉葛丽娟陈俊贞袁圆圆...

32-38页

查看更多>>摘要：为了探索宿主蛋白Rab11a在感染牛病毒性腹泻病毒(BVDV)后，对细胞增殖的影响。通过CRISPR/Cas9基因编辑技术构建Rab11a基因稳定敲除的MDBK细胞株，设计靶向Rab11a基因的向导RNA表达载体，采用Western blot检测Rab11a基因敲除后的蛋白表达情况;使用实时荧光定量qPCR、免疫荧光染色试验、Reed-Muench法等技术检测BVDV感染Rab11a KO细胞后病毒RNA水平、双链RNA(dsRNA)积累水平、病毒滴度及致细胞病变(CPE)情况等。Western blot检测结果显示，成功构建出Rab11a基因敲除的细胞Rab11a KO;Rab11a基因敲除显著抑制BVDV 5'UTR mRNA和dsRNA水平的积累，感染36 h后，Scramble细胞明显有大量细胞病变，出现皱缩、碎裂、形成空泡后脱落等现象，Rab11a KO细胞的CPE现象明显低于Scramble细胞;在BVDV感染细胞12 h后，与Scramble细胞相比，Rab11a KO细胞的病毒滴度显著性降低，结果证明了敲除MDBK细胞的Rab11a基因对BVDV在胞内复制起到抑制作用。本研究结果为了解宿主蛋白Rab11a与BVDV的相互作用，以及Rab11a对病毒的复制增殖的作用提供了新的科学依据。

关键词：

Rab11a牛病毒性腹泻病毒CRISPR/Cas9复制

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一株H9N2亚型禽流感病毒抗原变异株产生原因的分析

乔淑媛滕巧泱李雪松刘芹防...

39-45页

查看更多>>摘要：目前，H9N2亚型禽流感病毒是我国最主要的低致病性禽流感病毒，造成禽养殖业的严重经济损失。H9N2禽流感病毒灭活疫苗是防控该疫病的最有效方式，然而，H9N2病毒在免疫压力下容易产生抗原变异，导致疫苗免疫失败，其机制尚不清楚。在前期研究中，我们通过模拟H9N2禽流感免疫压力筛选出携带HAD201N单点突变的逃逸株，但HAD201N如何导致H9N2病毒逃逸株出现的原因尚不明确。为此，本研究利用8质粒反向遗传技术方法拯救出1株A/Chicken/Shanghai/1/2006(H9N2)(简称SH1)及其免疫逃逸株rSH1-HAD201N。为了鉴定HAD201N是否通过影响H9N2禽流感病毒复制能力而导致病毒发生免疫逃逸，用0。001 MOI的病毒接种MDCK并测定其生长曲线，结果表明HAD201N点突变可显著降低rSH1病毒的复制能力，且病毒复制能力的变化不是rSH1病毒发生逃逸的主要原因。为了研究HAD201N是否通过影响H9N2病毒抗原变异而产生病毒逃逸株，将原毒株与突变毒株加入佐剂后免疫鸡以制备多克隆抗体血清，利用交叉HI试验，计算R值并分析抗原变异，结果表明rSH1与rSH1-HAD201N的R值为2，说明HAD201N会导致rSH1发生显著的抗原变异，从而使病毒在免疫压力下逃逸。本研究为探索H9N2禽流感病毒抗原变异规律及其疫苗研发奠定了基础。

关键词：

H9N2亚型禽流感病毒反向遗传技术点突变免疫逃逸

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一株羊口疮病毒的全基因组测序及功能分析

李阳马园王国华田普厚...

46-52页

查看更多>>摘要：为了更好了解羊口疮病毒(Orf virus，ORFV)基因组的数据库信息及功能分析，本试验通过Illumina TruSeq™ Nano DNA Sample Prep Kit方法构建文库对分离株ORFV-Q进行全基因组测序，进行NR注释、GO注释、KEGG注释等进行生物信息学分析。试验结果显示，ORFV-Q株基因组大小为127 160 bp，GC含量分布未见异常，预测到123个基因。根据NR数据库注释对比结果，有116个基因得到注释;根据GO数据库注释，其中参与生物学途径基因有30个，细胞组分基因有33个，分子功能基因有8个;通过与KEGG代谢通路数据库进行比对，有5个基因可以对应;Swiss-Prot数据库注释共有75个基因的蛋白序列功能被注释。本研究通过对ORFV-Q株进行全基因组测序，并对其进行基因组组分分析和基因功能注释，不仅为ORFV基因组的研究提供数据支持，也为后续疫苗的开发研究提供了理论依据。

关键词：

羊口疮病毒全基因组测序功能分析

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猪链球菌重组磷酸ABC转运体ATP酶的免疫保护效果评价

张小玲李日顺樊擎莹王海堃...

53-59页

查看更多>>摘要：猪链球菌(S。suis)是一种重要的人畜共患病原菌，给养猪业造成重大的经济损失。为了评估猪链球菌磷酸ABC转运体ATP酶蛋白的免疫保护效果，本研究构建了猪链球菌磷酸ABC转运体ATP酶原核表达载体进行蛋白的重组表达，纯化并制备该重组蛋白的亚单位疫苗，加强免疫接种后两周，检测其血清抗体效价、免疫保护率、各脏器载菌量以及炎性因子表达情况。结果显示，该蛋白经大肠杆菌表达后主要以可溶形式存在。ELISA检测表明该蛋白可以诱发小鼠产生高水平IgG抗体，免疫组小鼠抗体水平显著高于对照组，该重组蛋白对小鼠感染2型猪链球菌(S。suis serotype 2，S。suis 2)的保护率达到60%，显著降低了小鼠大脑、心脏及肺脏的载菌量，免疫组小鼠细胞因子IL-1β、IFN-γ、IL-6、IL-8和TNF-α的mRNA表达显著上调。研究表明猪链球菌重组磷酸ABC转运体ATP酶蛋白具有较强的免疫原性，是猪链球菌病潜在的亚单位疫苗候选蛋白。

关键词：

猪链球菌亚单位疫苗磷酸ABC转运体ATP酶免疫保护

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PCV-2、PCV-3、PCV-4三重PCR鉴别检测方法的建立与应用

王勤欧云文汪洋潘琴...

60-66页

查看更多>>摘要：为了建立一种快速鉴别检测猪圆环病毒2型(PCV-2)、猪圆环病毒3型(PCV-3)、猪圆环病毒4型(PCV-4)的方法，试验设计合成PCV-2、PCV-3、PCV-4特异性鉴别检测引物，经一步法三重RT-PCR反应条件的优化，建立了PCV-2、PCV-3、PCV-4三重PCR鉴别检测方法。该方法对PCV-2、PCV-3、PCV-4、PCV-2/PCV-3/PCV-4可分别扩增出216、415、678 bp、216 bp/415 bp/678 bp的特异性条带，检测PRV、PPV、PRRSV、CSFV、PEDV、TGEV均为阴性，对PCV-2、PCV-3、PCV-4的最低检测量分别为1。0×102、1。0×103、1。0×103拷贝/µL，与PCV-2、PCV-3、PCV-4单项PCR方法的符合率均为100%，应用该方法检测85份临床病料样品，PCV-2、PCV-3、PCV-4阳性感染率分别为21。17%、14。12%、4。71%。说明建立的PCV-2、PCV-3、PCV-4三重PCR鉴别检测方法具有良好的特异性、敏感性、准确性和临床适用性，为PCV-2、PCV-3、PCV-4的临床鉴别诊断提供一种简便、快速的分子生物学检测技术。

关键词：

PCV-2PCV-3PCV-4三重PCR鉴别检测

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针对非洲猪瘟病毒K205R基因实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用

乔思娜李丽薇赵款高飞...

67-72页

查看更多>>摘要：为了快速、准确检测非洲猪瘟病毒(African swin fever virus，ASFV)，本文根据我国流行毒株ASFV SY18(GenBank ID:MH766894。1)已公布的K205R基因序列设计并合成特异性引物及探针，建立针对K205R基因的TaqMan荧光定量PCR检测方法。经过特异性试验、敏感性试验、重复性试验和临床样品检测试验分析显示，本文建立的TaqMan荧光定量PCR检测方法Ct值与标准品在1×1011～1×102 copies/μL范围内具有很好的线性关系，相关系数为0。998，斜率为-2。797，检测下限为102 copies/μL，与其他能引起相似临床症状的猪源病毒无交叉反应。重复性试验结果显示，组间与组内变异系数均小于1。53774%，重复性好。本方法适用于临床样品及本实验室构建的表达ASFV K205R基因的重组猪繁殖与呼吸综合征病毒的鉴定及检测，对ASFV快速检测及ASF早期诊断有重要意义。

关键词：

非洲猪瘟病毒(ASFV)K205R基因荧光定量PCR检测方法

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