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非洲猪瘟病毒毒力因子MGF360-4L靶向降解RIPK3促进病毒复制的研究

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本研究首先利用CellTiter-Glo试剂盒测定MGF360-4L对细胞活力的影响;通过蛋白免疫印迹(Western-blot)检测MGF360-4L及其突变体对细胞坏死通路关键接头分子表达的影响;通过同源重组技术构建MGF360-4L缺失毒株(ASFV-ΔMGF360-4L);利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分析ASFV野生毒株(ASFV-WT)与其缺失毒株(ASFV-ΔMGF360-4L)复制水平的差异;通过Western-blot检测MGF360-4L缺失对ASFV诱导的细胞坏死的影响.结果表明,MGF360-4L包含1个RHIM,并通过溶酶体途径降解RIPK3,从而抑制细胞坏死通路的活化;MGF360-4L发挥上述功能依赖其RHIM结构域;ASFV-ΔMGF360-4L毒株复制水平低于野生毒株,且该缺失毒株能够诱导更高水平的细胞坏死.本研究证实ASFV毒力因子MGF360-4L依赖其RHIM结构域靶向降解RIPK3,并促进病毒自身复制,为ASFV致病机理的阐明提供了科学数据.
Virulence factor MGF360-4L of African swine fever virus facilitates viral replication by degrading RIPK3
In the present study,the effects of MGF360-4L on cell viability were first determined by CellTiter-Glo kit.The effects of MGF360-4L and its mutants on the expression of key adaptors of necrosis pathway were detected by Western-blot.MGF360-4L-deficient ASFV(ASFV-ΔMGF360-4L)was constructed by homologous recombination technique.Real-time quantitative fluorescent PCR(RT-qPCR)was used to analyze the replication difference between wild-type ASFV(ASFV-WT)and ASFV-ΔMGF360-4L.The effects of MGF360-4L deletion on ASFV-induced necrosis were detected by Western blot.These results indicated that MGF360-4L contained a RHIM and degraded RIPK3 via the lysosomal pathway,thereby inhibiting the activation of necrosis signal.MGF360-4L promoted the degradation of RIPK3 in a RHIM domain-dependent manner.ASFV-ΔMGF360-4L had a lower replication level than that of ASFV-WT,and the deficient strain induced higher levels of necrosis.Altogether,our study suggests that ASFV virulence factor MGF360-4L degrades RIPK3 relied on its RHIM motif and promotes viral replication,which provides scientific data for the elucidation of ASFV pathogenesis.

African swine fever virusnecroptosisRHIMRIPK3MGF360-4L

曹雪静、范许许、朱兆宇、裴丹诗、王一卓、张继燕、何路、李熙忠、任青峰、郑海学、万博、李伟伟

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河南农业大学动物医学院,河南郑州 450002

中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室,甘肃兰州 730046

非洲猪瘟病毒 细胞坏死 RHIM RIPK3 MGF360-4L

国家重点研发计划项目国家重点研发计划项目家畜重要疫病感染与免疫防控的基础理论研究项目中央高校基本科研业务费专项资金资助(学科交叉创新团队建设项目)国家自然科学基金青年项目国家自然科学基金青年项目甘肃省青年科技基金计划项目中国博士后科学基金项目国家生猪产业技术体系项目国家生猪产业技术体系项目国家生猪技术创新中心先导科技项目中国农业科学院创新计划项目中国农业科学院创新计划项目"十四五"广东省农业科技创新十大主攻方向"揭榜挂帅"项目兰州兽医研究所基本科研业务项目家畜重要疫病诊断研制与产业化项目

2021YFD18013002021YFD180030022ZD6NA001lzujbky-2022-ct02322027813230285722JR5RA0342023M743830CARS-35CARS-39-13NCTIP-XD/C03CAAS-CSLPDCP-2023002CAAS-ASTIP-2023-LVRI2023SDZG02161031202100922ZD6NA012

2024

10.16656/j.issn.1673-4696.2024.0132

中国兽医科学
中国农业科学院兰州兽医研究所

中国兽医科学

CSTPCD北大核心
影响因子：0.524
ISSN：1673-4696
年,卷(期)：2024.54(8)
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