非洲猪瘟病毒DP71L蛋白原核表达及其多克隆抗体制备

Prokaryotic expression of African swine fever virus DP71L protein and preparation of polyclonal antibody

李志煜 ¹马旭升 ²马永华 ³郑海学²

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作者信息

1. 甘肃农业大学动物医学院,甘肃兰州 730070;中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室,甘肃兰州 730000
2. 中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室,甘肃兰州 730000
3. 甘肃农业大学动物医学院,甘肃兰州 730070
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摘要

为深入研究非洲猪瘟病毒(ASFV)DP71L蛋白的生物学功能,根据非洲猪瘟病毒ASFV CN/GS/2018 DP71L基因序列设计特异性引物,通过扩增DP71L基因并克隆到原核表达载体pET28a(+)后转入大肠杆菌BL21(DE3)诱导表达,通过SDS-PAGE、Western-blot进行鉴定,并以纯化出的重组DP71L蛋白免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗体,间接ELISA测定多克隆抗体效价,Western-blot鉴定多克隆抗体的特异性.结果显示,重组DP71L蛋白以可溶物和包涵体两种形式表达;间接ELISA测得多克隆抗体血清效价为1∶64 000;Western-blot结果显示,该抗体能特异性识别DP71L蛋白.结论:成功地表达了DP71L重组蛋白,制备了多克隆抗体,为深入研究DP71L蛋白生物学功能奠定了基础.

Abstract

To study the biological function of DP71L protein of African swine fever virus(ASFV),the specific primers of ASFV CN/GS/2018 DP71L were designed according to the gene sequence of ASFV CN/GS/2018 DP71L.The DP71L gene was amplified and cloned into the prokaryotic expression vector pET28a(+),and then transformed into Escherichia coli BL21(DE3)to induce expression.BALB/c mice were immu-nized with the purified recombinant DP71L protein to prepare polyclonal antibody.The serum titer of the polyclonal antibody was determined by indirect ELISA,and the specificity of the polyclonal anti-body was identified by Western-blot.The results showed that the recombinant DP71L protein was ex-pressed in soluble form and inclusion body form.The titer of polyclonal antibody was 1∶64 000 measured by indirect ELISA.Western-blot results showed that the antibody specifically recognized the DP71L protein.The results showed that the recombinant DP71L protein was successfully expressed and the poly-clonal antibody was prepared,which laid a foundation for further study on the biological function of DP71L protein.

关键词

非洲猪瘟/DP71L蛋白/原核表达/多克隆抗体

Key words

African swine fever/DP71L protein/prokaryotic expression/polyclonal antibody

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基金项目

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第三批甘肃省拔尖领军人才培养项目()

出版年

2024

中国兽医科学

中国农业科学院兰州兽医研究所

中国兽医科学

CSTPCDCSCD北大核心

影响因子：0.524

ISSN：1673-4696

参考文献量25

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