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猪瘟病毒E0+E2基因的串联表达及多克隆抗体制备

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串联表达猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)E0和E2蛋白,并制备多克隆抗体鉴定其免疫原性,为进一步研究亚单位疫苗和猪瘟ELISA抗体检测方法提供材料.应用PCR技术分别扩增CSFV E0和E2基因片段,运用重叠PCR将其串联扩增后克隆至pET-28a载体,构建重组表达质粒pET-28a-E0+E2.通过大肠杆菌表达系统表达重组蛋白E0+E2,切胶纯化后免疫昆明小鼠制备血清,通过间接ELISA方法测定抗体水平,间接免疫荧光(IFA)分析多克隆抗体的免疫原性和特异性.结果显示,37℃,1 mmol/LIPTG诱导条件下,E0+E2蛋白能够以包涵体形式表达,经纯化复性后免疫小鼠,制备的血清能与感染CSFV的细胞特异性反应.在大肠杆菌中高效表达了 E0+E2蛋白,制备的多克隆抗体具有较高的特异性和反应性.
Tandem expression of E0+E2 gene of classical swine fever virus and preparation of polyclonal antibody

向蕊、朱利塞、陶攀、白挨泉、王贵平、贾爱卿

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佛山科学技术学院,广东佛山528231

广东海大畜牧兽医研究院,广东广州511400

广东省养猪与猪病防控技术研究企业重点实验室,广东广州 511400

猪瘟病毒 E2蛋白 E0蛋白 串联表达 多克隆抗体

番禺区创新创业领军团队资助项目广东省现代农业产业技术体系生猪产业体系资助项目广州市科学研究计划重点项目广东省重点领域研发计划资助项目

2017-R02-42021KJ1262018040200062019B020218004

2023

10.16303/j.cnki.1005-4545.2023.01.06

中国兽医学报
吉林大学

中国兽医学报

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：0.702
ISSN：1005-4545
年,卷(期)：2023.43(1)
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