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中国兽医学报
中国兽医学报

王哲

月刊

1005-4545

xbcjvs@163.com

0431-87836534

130062

长春市西安大路5333号

中国兽医学报/Journal Chinese Journal of Veterinary ScienceCSCD北大核心CSTPCD
查看更多>>本学报是由解放军军需大学主办的兽医专业学术性期刊，是国内兽医界最有影响的权威性核心期刊之一。被CA、CAB、AGRIS、中国生物学文摘、中国农业文摘及中国科学引文索引等近20种国内外数据库或检索性刊物收录。《中文核心期刊要目总览》列为中国兽医科学核心期刊。中科院医学信息研究所确定其为中国生物医学核心期刊。
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    猪丁型冠状病毒S蛋白在昆虫细胞中的表达及单克隆抗体的制备与鉴定

    李丹彤何庆王东亮喻蓓蕾...
    2309-2315页
    查看更多>>摘要：猪丁型冠状病毒(PDCoV)是近年来新发现的冠状病毒,可引起仔猪严重的腹泻、呕吐、脱水甚至死亡.S蛋白是PDCoV的重要结构蛋白,决定着病毒的宿主或组织嗜性,也是研制PDCoV疫苗和检测方法的重要靶点.为制备PDCoV S蛋白的单克隆抗体,本研究基于国内PDCoV流行毒株S蛋白胞外域序列,构建S蛋白重组质粒转化DH10Bac感受态细胞,经蓝白斑筛选及PCR鉴定重组Bacmid,通过昆虫—杆状病毒系统表达S蛋白.将获得的S蛋白免疫BALB/c小鼠,并以免疫后小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合,通过间接ELISA方法和亚克隆筛选出稳定分泌抗体的阳性杂交瘤细胞.免疫印迹和间接免疫荧光试验(IFA)鉴定出5株(2E5、4D5、5D10、2F7和5A9)特异性识别S蛋白的杂交瘤细胞.中和试验表明,3株单克隆抗体(2E5、4D5和5D10)具有病毒中和作用.本研究成功表达了 S蛋白及制备了 5株能稳定分泌与PDCoV病毒和S蛋白特异性结合的单克隆抗体,为进一步研究S蛋白的结构与功能、PDCoV感染的检测方法开发、预防或治疗用制剂等研究奠定了重要基础.

    猪丁型冠状病毒S蛋白昆虫-杆状病毒表达单克隆抗体中和抗体

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    猪繁殖与呼吸综合征病毒MS2装甲病毒样颗粒质控品的制备及应用

    何嘉敏庞旋飞罗律杨佳臻...
    2316-2323页
    查看更多>>摘要：为研制一种可以应用猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)实时荧光定量PCR(RT-qPCR)核酸检测的阳性质控品,本研究使用MS2噬菌体装甲RNA(Armored RNA)技术制备PRRSV-1和PRRSV-2 M基因的阳性质控品.将扩增的PRRSV-1和PRRSV-2 M基因进行纯化回收,连接到内含MS2成熟酶蛋白基因与衣壳蛋白的pET28b载体,通过转化至BL21(DE3)后,经IPTG诱导表达,利用PEG6000沉淀法纯化,制备出内含PRRSV M 基因装甲RNA病毒样颗粒(AR-PRRSV).后续进行性能评估,作为PRRSV-1和PRRSV-2 M基因的阳性质控品,AR-PRRSV1M和AR-PRRSV2M使用YY/T 1652-2019标准进行计算,数据表明均匀性良好,-20、4、25 ℃能稳定保存60 d,37 ℃能稳定保存30 d.使用RT-qPCR进行初步定量后,利用数字定量PCR(ddPCR)对制备的装甲病毒样颗粒AR-PRRSV1M 和 AR-PRRSV2M 进行定值,结果 104 拷贝/μL 的 AR-PRRSV1M 和 AR-PRRSV2M ddPCR 定值均为(1.33±0.50)×104拷贝/μL.本研究结果表明,应用定值后的AR-PRRSVM,能够实现对检测全过程(核酸提取、反转录和RT-qPCR)的质量控制.

    猪繁殖与呼吸综合征病毒装甲RNA核酸检测质控品

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    NLRX1通过促进ROS分泌抑制NDV增殖

    付永恒李金斗丁佳欣丁壮...
    2324-2333页
    查看更多>>摘要：为探讨核苷酸结合寡聚化结构域受体家族成员X1(nucleotide-binding domain and leucine-rich-repeat-containing family memberX1,NLRX1)在新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)复制过程中的作用,本研究检测了 NDV NA-1毒株感染10日龄SPF雏鸡和HD11细胞后NLRX1的表达水平,以及病毒在NLRX1过表达或低表达时的NDV的增殖情况、HD11细胞促炎因子的表达情况和氧化应激状态.结果表明:NA-1感染可引起体内外NLRX1表达的增加;NLRX1过表达则会抑制病毒的增殖,提高细胞IL-1β、IL-6和IFN-β的表达.而NLRX1升高不会引起细胞自噬和凋亡细胞水平的变化,但是会使细胞在24 h内iNOS、Keap1、Nrf2、NQO1和HO-1的mRNA水平均升高.综上,NLRX1可能通过促进早期ROS的产生从而抑制NDV的增殖.

    新城疫病毒NLRX1iNOS活性氧

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    靶向伪狂犬病病毒UL35基因的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法的建立

    张心雨吴红霞李永锋孙元...
    2334-2340页
    查看更多>>摘要：对伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)感染后不同时间点UL35和gB基因的进行定量分析,发现在感染细胞后2.5、5.0以及20.0 h时,两者基因组拷贝数具有显著差异,并且在PRV感染早期可以观察到UL35基因的表达.为了确定UL35基因能否作为诊断PRV感染的靶标,本研究根据PRV不同毒株UL35基因保守序列,设计合成特异性荧光定量PCR引物,扩增长度为54 bp的片段.通过优化反应条件和反应体系,结果显示,建立的PRV SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法具有良好的重复性和特异性,其标准曲线与模板浓度呈现良好的线性关系;对猪繁殖和呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)、猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)、非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)核酸扩增均呈阴性;将所建立的方法与同类方法进行比较,敏感性无差异;组间和组内重复性试验的变异系数小于2％.用本试验所建立的方法对PRV感染小鼠的组织样品进行检测,均检测到一定的病毒载量.结果表明,UL35基因可以作为诊断PRV感染的靶标.

    伪狂犬病病毒UL35基因SYBRGreenⅠ定量PCR

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    山羊地方性鼻内肿瘤病毒安徽株全基因组序列分析

    李翎旭王珍郭文晴林子彦...
    2341-2347页
    查看更多>>摘要：获得安徽地区2株山羊地方性鼻内肿瘤病毒(enzootic nasal tumor virus-2,ENTV-2)全基因组序列,分析EN-TV-2 基因的遗传多样性.采集安徽某羊场6只患地方性鼻内腺癌(enzootic nasal adenocarcinoma,ENA)的山羊鼻腔分泌物和血液样品,采用Trizol法提取总RNA,去除其中DNA干扰完成两步法反转录,PCR检测病料中的EN-TV-2.选择其中2只山羊的阳性样品,采用5对引物扩增ENTV-2全基因组序列,测序拼接后上传NCBI数据库,与数据库中序列进行比较分析并构建遗传进化树.本研究在6只病羊鼻腔分泌物样品中均可检测出ENTV-2,而血液中不能检出.ENTV-2基因全长约7 400 bp,分别命名为ENTV-2AH1(DDBJ登录号:LC762616)和ENTV-2AH2(DDBJ登录号:LC762617),序列分析显示与国内福建株(ENTV-2FJ)、广西株(ENTV-2-DA0)同源性分别为99.2％、99.1％,并且处于同一进化分支.本研究首次在安徽地区检测到山羊地方性鼻内肿瘤病毒,获得了 ENTV-2全基因组序列,有助于进一步研究国内ENTV-2遗传多样性.

    山羊地方性鼻内肿瘤病毒地方性鼻内腺癌全基因组序列

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    检测牛肠道病毒RT-RAA-LFD方法的建立与初步应用

    张福慧郑学博崔续媛章凡...
    2348-2355页
    查看更多>>摘要：本研究研发了一种基于重组酶介导核酸扩增(RAA)技术结合胶体金试纸条快速检测牛肠道病毒(BEV)的方法.以高度保守的BEV 5'UTR作为靶序列,设计出特异性引物,下游引物5'端标记生物素,探针5'端标记6-FAM,初步建立RT-RAA方法.将鼠源抗6-FAM单克隆抗体作为金标抗体,链霉亲和素包被于检测线,羊抗鼠IgG包被于质控线,组装试纸条.将RAA技术与制备的胶体金试纸条相结合,建立起检测牛肠道病毒的RT-RAA-LFD方法,并对该方法的特异性、敏感性与重复性及临床应用等方面进行了评价.结果显示,该方法最佳引物浓度为5 μmol/L,在35 ℃反应8 min即可完成对BEV核酸的扩增;该方法最低检测限为101拷贝/μL,且与牛病毒性腹泻病毒、牛细小病毒、口蹄疫病毒均无交叉反应;制备的试纸条于4 ℃条件下,有效期至少为90 d;74份临床样品检测结果显示,该方法与RT-PCR检测结果一致.上述结果表明,本研究建立的BEV RT-RAA-LFD方法灵敏度高、特异性强,且操作更加便捷,适用于临床现场检测,为BEV感染的诊断和流行病学调查提供了新的技术手段.

    牛肠道病毒5'UTRRT-RAA-LFD胶体金试纸条

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    羊源溶血性曼氏杆菌A1型灭活疫苗的制备及免疫效果评价

    夏子涵李妍马媛张焕容...
    2356-2362页
    查看更多>>摘要：溶血性曼氏杆菌是引起羊呼吸道疾病的重要病原,研制羊源溶血性曼氏杆菌灭活疫苗是防控该病原的有效手段.本研究从某绵羊场采集的病料中分离的溶血性曼氏杆菌,通过小鼠致病性试验筛选出最适制苗菌株,并以4种抗原量(106、107、108、109 CFU/mL)与3种佐剂(ISA 201佐剂、ISA 206佐剂、铝佐剂)组合制备灭活疫苗,经免疫和攻毒保护试验,筛选出灭活疫苗制备的最佳抗原量和佐剂.最后,利用筛选出的最佳条件制备疫苗,观察免疫绵羊的抗体水平动态变化.结果显示,共分离得到24株绵羊源溶血性曼氏杆菌,其中血清A1型12株,为该羊场感染的优势血清型;筛选获得1株绵羊源溶血性曼氏杆菌A1型菌株(Mh1)为制苗用菌株,其对小鼠的半数致死量为3.16× 107 CFU/mL,具有较强的致病性,可造成小鼠的心脏、肝脏、脾脏、肺脏和肾组织不同程度的炎性细胞浸润等病理损伤;免疫及攻毒保护试验结果显示,灭活疫苗的最佳抗原量为109 CFU/mL,最适佐剂为ISA 201,刺激产生的抗体水平最高,对小鼠的保护率达100％,免疫绵羊后可诱导产生良好的体液免疫.结果表明,本研究制备的羊源溶血性曼氏杆菌A1型灭活疫苗具有良好的免疫保护效果,为进一步研发羊源溶血性曼氏杆菌商品化疫苗奠定了良好的基础.

    绵羊溶血性曼氏杆菌灭活疫苗免疫研究

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    牛羊多杀性巴氏杆菌多重TaqMan qPCR检测方法的建立

    郭亚男张正刚王建东王景松...
    2363-2370页
    查看更多>>摘要：为建立多杀性巴氏杆菌多重TaqMan荧光定量PCR检测方法,根据NCBI数据库中多杀性巴氏杆菌hyaC-hy-aD、bcbD、dcbF、ecbJ、fcbD 5种荚膜基因序列设计特异性引物和荧光标记探针,通过梯度设置调整退火温度,用矩阵法对引物与探针浓度进行优化,构建标准曲线,进行特异性、灵敏度及重复性试验,最终建立针对这5种基因的多重TaqMan qPCR检测方法.结果显示,建立的检测方法其扩增曲线具有良好的线性关系;灵敏度较高,比普通PCR高10～100倍;特异性强,对芽孢杆菌、奇异变形杆菌、金黄色葡萄球菌、放射根瘤菌等8种病原菌DNA检测均无扩增曲线;组间及组内重复性试验Ct值变异系数均小于3％;通过对90份临床样本进行检测,显示该检测方法比常规PCR检测方法检出率高出11.25％.结果表明本研究建立的方法能够快速、高效地检测多杀性巴氏杆菌及其荚膜分型,对临床和实验室的快速诊断具有重要意义.

    牛羊多杀性巴氏杆菌荚膜分型多重TaqMan荧光定量PCR检测方法

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    西藏牦牛源牛支原体对大环内酯类抗生素的耐药机制

    罗婷韩著徐业芬徐晋花...
    2371-2378页
    查看更多>>摘要：采用微量法对10株西藏牦牛源牛支原体进行了大环内酯类抗生素的药物敏感性试验,并对敏感株进行了体外高度耐药株的诱导,对敏感株、耐药株和体外高度耐药株进行了靶位基因突变分析,甲基化酶基因、钝化酶基因以及药物主动外排系统的检测,以揭示大环内酯类药物耐药机制.结果显示:10株牛支原体对大环内酯类抗生素均存在不同程度的耐药性,但经过甲基化酶和钝化酶基因检测分析,发现均不存在甲基化酶基因编码的甲基化酶和大环内酯类钝化酶介导的耐药机制,说明敏感株和耐药株的靶位基因位点均未发生突变;而体外高度耐药株在Domain-Ⅱ、L22和L4靶位基因位点发生了突变,从而说明若存在2个及2个以上靶位基因氨基酸位点发生突变,则可产生高度耐药株;经过主动外排系统检测,发现均不存在以大环内酯类抗生素为底物的主动外排系统.由此可见,西藏牦牛源牛支原体在大环内酯类药物高浓度的压力下,菌株容易发生突变,且存在2个及2个以上靶位基因氨基酸位点发生突变,则容易产生高度耐药株.

    牦牛源牛支原体大环内酯类抗生素基因位点突变耐药机制

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    鹦鹉蛔虫的鉴定及其线粒体基因组的分析

    李娜任照文王娅妮张翩...
    2379-2385页
    查看更多>>摘要：旨在通过形态学分析和分子生物学技术鉴定来自广东地区的折衷鹦鹉和大绯胸鹦鹉肠道内蛔虫,并使用PCR技术扩增鹦鹉蛔虫的线粒体基因组,同时基于其线粒体基因序列进行了系统发育分析.结果显示,在本次鉴定中发现的鹦鹉蛔虫为Ascaridia nymphii,其线粒体基因组包括12个蛋白质编码基因,22个tRNA基因,2个核糖体RNA基因以及2个非编码区.系统发育分析显示,本研究鉴定到的A.nymphii与先前报道的Ascaridia sp.位于同一进化分支,具有较近的亲缘关系,并与鸽蛔虫和鸡蛔虫构成一个独立的禽蛔虫支系.这一研究为鹦鹉蛔虫的分类、分子流行病学和种群遗传进化提供了重要的数据支持.

    鹦鹉蛔虫线粒体基因系统发育分析

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