摘要
目的 探讨被转化生长因子b激活的长链非编码RNA(lncRNA-ATB)对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和凋亡的影响,并分析其作用机制.方法 检测瘢痕疙瘩和正常皮肤组织中ATB、microRNA-200c(miR-200c)和DNA甲基转移酶DNMT3B的表达水平,并分析其相关性.在成纤维细胞中分别转染sh-ATB、o/e-ATB、miR-200c mimics、miR-200c inhibitors和sh-DNMT3B,采用CCK-8法检测细胞增殖情况;流式细胞分析仪检测细胞凋亡情况;双荧光素酶测定法检测ATB和miR-200c、miR-200c和DNMT3B靶向结合情况;Western blotting和qRT-PCR检测增殖相关分子周期素依赖性激酶6(CDK6)和凋亡相关分子半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)相对表达量.结果 ATB和DNMT3B在瘢痕疙瘩组织中的表达水平均高于正常皮肤(P<0.05),miR-200c在瘢痕疙瘩组织中的表达水平低于正常皮肤(P<0.05),同时ATB与miR-200c在瘢痕疙瘩组织中呈负相关(rs=-3.429,P<0.05),miR-200c与DNMT3B在瘢痕疙瘩组织中呈负相关(rs=-2.011,P<0.05).双荧光素酶结果显示ATB能够靶向结合miR-200c,miR-200c能够靶向结合DNMT3B.在瘢痕疙瘩成纤维细胞中转染sh-ATB或miR-200c mimics后,细胞的增殖能力和增殖相关分子CDK6的表达水平均降低(P<0.05),细胞的凋亡率和凋亡相关分子Caspase-3的表达水平均升高(P<0.05).在回复实验中,瘢痕疙瘩成纤维细胞中共转染sh-ATB和miR-200c inhibitors能够逆转单独转染sh-ATB对细胞增殖和凋亡的影响(P>0.05),共转染o/e-ATB和miR-200c inhibitors能够进一步增强单独转染o/e-ATB对细胞增殖和凋亡的影响(P<0.05);瘢痕疙瘩成纤维细胞中共转染miR-200c inhibitors和sh-DNMT3B能够逆转单独转染miR-200c inhibitors对细胞增殖和凋亡的影响(P<0.05),共转染miR-200c mimics和sh-DNMT3B能够进一步增强单独转染miR-200c mimics对细胞增殖和凋亡的影响(P<0.05).结论 ATB在瘢痕疙瘩组织中高表达,低表达ATB能够通过调控miR-200c/DNMT3B通路,抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖,并促进细胞凋亡.
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