摘要
目的 探讨microRNA-219a-5p(miR-219a-5p)和肌动蛋白丝相关蛋白1相似蛋白2(AFAP1L2)对胰腺癌细胞的作用.方法 分别采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western blotting法检测胰腺癌细胞株(PANC-1、BXPC-3、SW1990、Capan-1)及正常胰腺导管上皮细胞(HPDE)miR-219a-5p、AFAP1L2的表达,采用siRNA及过表达质粒下调或上调AFAP1L2表达,CCK-8法观察胰腺癌细胞株增殖变化.采用mimics或inhibitor上调或下调miR-219a-5p表达,CCK-8法观察胰腺癌细胞株增殖变化.流式细胞术检测不同干预条件下细胞凋亡和细胞周期.生物信息学预测两者可能具有靶向调控关系.qRT-PCR和Western blotting法检测AFAP1L2 mRNA及蛋白表达,荧光素酶实验观察二者碱基配对关系,进一步验证miR-219a-5p对AFAP1L2具有靶向调控作用.结果 与HPDE细胞比较,胰腺癌细胞株中miR-219a-5p表达较低(P<0.05).AFAP1L2 mRNA及蛋白在胰腺癌细胞株中的表达高于在HPDE细胞中的表达(P<0.05).Capan-1或SW1990细胞培养48 h后,与空白对照组(NC组)比较,pCMV-EGFP-AFAP1L2组光密度(OD)值升高(P<0.05),siAFAP1L2组OD值下降(P<0.05),AFAP1L2对胰腺癌细胞增殖具有正向调控作用.Capan-1及SW1990细胞培养48 h后,与miR-NC组比较,miR-219a-5p mimics组OD值下降(P<0.05),miR-219a-5p inhibitor组OD值升高(P<0.05),miR-219a-5p表达对胰腺癌细胞增殖具有负向调控作用;上调miR-219a-5p表达,可诱导细胞S期阻滞,导致细胞凋亡增加.miR-219a-5p负向调控AFAP1L2表达;荧光素酶实验显示,miR-219a-5p与AFAP1L2的3'-URT互补结合,miR-219a-5p与AFAP1L2存在靶向调控关系.结论 miR-219a-5p通过靶向调控AFAP1L2表达负向介导胰腺癌细胞增殖及凋亡.
基金项目
河北省医学科学研究重点课题计划(20160540)
2018年河北省自然科学基金资助面上项目(H2018206180)
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