摘要
目的 探讨Sonic Hedgehog(SHH)信号通路相关基因在骨髓增生异常综合征(MDS)患者中的表达及Smoothened(SMO)抑制剂Jervine对MUTZ-1细胞的作用.方法 选取2016年6月—2018年3月于新疆医科大学第一附属医院血液病中心经骨髓细胞形态学、染色体R显带分析、荧光原位杂交、流式细胞术检查确诊的53例MDS患者.依据国际预后积分系统(IPSS)对患者预后分组,低危组2例,中危1组16例,中危2组21例,高危组14例.将低危组和中危1组归为相对低危组,中危2组和高危组归为相对高危组.选取同期该院25例缺铁性贫血患者作为正常对照组.采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测3组患者的SHH、Patched-1、SMO和Gli-1 mRNA相对表达量;终浓度0μmol/L、1μmol/L、5μmol/L、10μmol/L Jervine作用于MUTZ-1细胞,孵育24 h;CCK-8法检测Jervine 0μmol/L组、Jervine 1μmol/L组、Jervine 5μmol/L组、Jervine 10μmol/L组MUTZ-1细胞的增殖率;Annexin V-FITC/PI双染色流式细胞术检测4组MUTZ-1细胞的凋亡率;qRT-PCR检测4组MUTZ-1细胞的SMO、Gli-1 mRNA相对表达量;Western blotting法检测4组MUTZ-1细胞SMO、Gli-1、Bcl-2、Caspase-3和Cyclin D1蛋白相对表达量.结果 3组患者的SHH、Patched-1 mRNA相对表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05);SMO、Gli-1 mRNA相对表达量比较,差异有统计学意义(P<0.05),相对高危组SMO和Gli-1 mRNA的相对表达量高于正常对照组和相对低危组(P<0.05).SMO基因高、低表达组患者和Gli-1基因高、低表达组患者3年累积生存率比较,均差异有统计学意义(P<0.05).Jervine 0μmol/L组、Jervine 1μmol/L组、Jervine 5μmol/L组、Jervine 10μmol/L组MUTZ-1细胞的增殖率比较,差异有统计学意义(P<0.05),MUTZ-1细胞增殖率与Jervine浓度呈负相关(r=-0.977,P=0.000),随Jervine浓度的升高而降低;Jervine 0μmol/L组、Jervine 1μmol/L组、Jervine 5μmol/L组、Jervine 10μmol/L组MUTZ-1细胞的凋亡率比较,差异有统计学意义(P<0.05),MUTZ-1细胞凋亡率与Jervine浓度呈正相关(r=0.997,P=0.000),随Jervine浓度的升高而增加.Jervine 0μmol/L组、Jervine 1μmol/L组、Jervine 5μmol/L组、Jervine 10μmol/L组MUTZ-1细胞的SMO、Gli-1 mRNA相对表达量和蛋白相对表达量比较,差异有统计学意义(P<0.05),Jervine 5μmol/L组和Jervine 10μmol/L组低于Jervine 0μmol/L组(P<0.05).Jervine 1μmol/L组、Jervine 5μmol/L组、Jervine 10μmol/L组与Jervine 0μmol/L组比较,Bcl-2、Cyclin D1蛋白相对表达量降低(P<0.05),Caspase-3蛋白相对表达量升高(P<0.05).结论 MDS患者SHH信号通路异常激活,参与MDS的发生、发展,Jervine能有效抑制MUTZ-1细胞增殖,促进其凋亡.
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