摘要
目的 探讨microRNA-181b(miR-181b)能否通过靶向调控NDRG2参与2型糖尿病胰岛素分泌的调节.方法 选用小鼠胰岛β细胞进行体外传代培养,构建NDRG2野生型(NDRG2WT-1uc)与突变型(NDRG2MUT-1uc)荧光素酶报告基因质粒并进行转染,转染结束后进行双荧光素酶报告分析.构建NDRG2过表达和敲低质粒并转染小鼠胰岛β细胞,检测NDRG2 mRNA和蛋白表达、胰岛素分泌量.未转染的小鼠胰岛β细胞培养48 h后采用实时荧光定量聚合酶链反应检测miR-181b和NDRG2 mRNA的表达.采用葡萄糖刺激的胰岛素释放试验检测5 mmol/L和20 mmol/L葡萄糖条件下的小鼠胰岛β细胞分泌的胰岛素.结果 ①荧光素酶报告基因实验检测发现,各组相对荧光强度比较,差异有统计学意义(P<0.05).miR-181b模拟物可以明显抑制NDRG2WT-luc的3´端非翻译区的表达,但对NDRG2-MUT组和Control组无明显影响;miR-181b inhibitor可以加强NDRG2WT-luc的3´-端非翻译区的表达,但对NDRG2-MUT组和Control组无明显影响.②过表达组NDRG2 mRNA和蛋白相对表达量高于过表达对照组(P<0.05);在5 mmol/L葡萄糖条件下,过表达组与过表达对照组胰岛素分泌量比较,差异无统计学意义(P>0.05);在20 mmol/L葡萄糖条件下,过表达对照组胰岛素分泌量高于过表达组(P<0.05).敲低组NDRG2 mRNA和蛋白相对表达量低于敲低对照组(P<0.05);在5 mmol/L葡萄糖条件下,敲低组与敲低对照组胰岛素分泌量比较,差异无统计学意义(P>0.05);在20 mmol/L葡萄糖条件下,敲低组胰岛素分泌量高于敲低对照组(P<0.05).③5 mmol/L葡萄糖组与对照组的miR-181b和NDRG2 mRNA相对表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05);20 mmol/L葡萄糖组miR-181b相对表达量高于对照组和5 mmol/L葡萄糖组(P<0.05),NDRG2 mRNA相对表达量低于对照组和5 mmol/L葡萄糖组(P<0.05).④5 mmol/L葡萄糖条件下,Control组、miR-181b mimics组、miR-181b inhibitor组胰岛素分泌量比较,差异无统计学意义(P>0.05).在20 mmol/L葡萄糖条件下,miR-181b mimics组胰岛素分泌量高于Control组(P<0.05),miR-1b1 inhibitor组胰岛素分泌量低于Control组和miR-181b mimics组(P<0.05).结论 miR-181b可以通过靶向抑制NDRG2的表达来提高胰岛素的分泌.
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