摘要
目的 探究塞来昔布对离体人膝骨关节炎细胞凋亡及表皮生长因子受体/丝裂原激活蛋白激酶(EGFR/MAPK)通路的影响.方法 体外分离及培养膝关节软骨细胞,并以甲苯胺蓝染色鉴定软骨细胞.将细胞分为空白对照组(人正常膝骨关节软骨细胞不做特殊处理)、模型组(人膝骨关节炎软骨细胞不做特殊处理)及塞来昔布低、高剂量组(人膝骨关节炎软骨细胞中分别加入含终浓度为50μmol/L和200μmol/L塞来昔布溶液的培养液).采用CCK-8法、AnnexinV/PITC双染法分别检测各组细胞增殖、凋亡能力,Western blotting检测细胞增殖、凋亡及EGFR/MAPK通路蛋白的表达.结果 甲苯胺蓝染色结果显示,人正常膝骨关节软骨细胞、人膝骨关节炎软骨细胞内见蓝紫色异染颗粒,细胞核呈深蓝色,细胞质呈浅蓝色;与人膝骨关节炎软骨细胞形态比较,人正常膝骨关节软骨细胞体积较大,形态较规则,蓝紫色异染颗粒较多.与空白对照组比较,模型组,塞来昔布低、高剂量组细胞存活率降低(P<0.05),凋亡率升高(P<0.05);与模型组比较,塞来昔布低、高剂量组细胞存活率升高(P<0.05),凋亡率降低(P<0.05);与塞来昔布低剂量组比较,塞来昔布高剂量组细胞存活率升高(P<0.05),凋亡率降低(P<0.05).与空白对照组比较,模型组,塞来昔布低、高剂量组EGFR、MMP-9、Caspase-3蛋白相对表达量升高(P<0.05),p-P38 MAPK/P38 MAPK蛋白相对表达量降低(P<0.05);与模型组相比,塞来昔布低、高剂量组EGFR、MMP-9、Caspase-3蛋白相对表达量降低(P<0.05),p-P38 MAPK/P38 MAPK蛋白相对表达量升高(P<0.05);与塞来昔布低剂量组比较,塞来昔布高剂量组EGFR、MMP-9、Caspase-3蛋白相对表达量降低(P<0.05),p-P38 MAPK/P38 MAPK蛋白相对表达量升高(P<0.05).结论 塞来昔布能促进离体人膝骨关节炎细胞增殖,抑制细胞凋亡.其作用可能是通过抑制EGFR表达,促进P38 MAPK通路活化实现的.
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