摘要
目的 观察异丙酚通过缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)/细胞外调节激酶(ERK)通路对缺氧大鼠海马神经元线粒体损伤的影响.方法 新生SD大鼠离体培养原代海马神经元细胞,随机分为6组.对照组(高糖DMEM培养液)、缺氧组(低糖DMEM培养液)、LP组(3 mg/L异丙酚的低糖DMEM培养液)、MP组(6 mg/L异丙酚的低糖DMEM培养液)、HP组(12 mg/L异丙酚的低糖DMEM培养液)及U0126组(终浓度12 mg/L异丙酚+50μmol/L U0126的低糖DMEM培养液).缺氧组、LP组、MP组、HP组及U0126组于缺氧条件培养24 h;对照组于有氧条件培养24 h.透射电镜观察各组海马神经元细胞形态;MTT法检测细胞存活率;激光共聚焦显微镜检测Ca2+、活性氧(ROS)的荧光强度;酶联免疫吸附试验检测细胞钙调神经磷酸酶(GaN)活性;Western blotting检测HIF-1α、ERK1/2、p-ERK1/2、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)蛋白表达.结果 缺氧组线粒体损伤严重,LP、MP和HP组线粒体损伤均有所减轻,HP组减轻最为明显,U0126组线粒体损伤较HP组严重.与缺氧组海马神经元细胞存活率(42.30±3.64)％比较,MP组(59.54±5.19)％、HP组(70.81±6.47)％及U0126组(53.08±5.61)％均升高,且HP组高于MP组和U0126组(P<0.05).与缺氧组Ca2+、ROS荧光强度[(0.107±0.004)、(0.087±0.003)]比较,LP组ROS荧光强度(0.078±0.003)及MP组、HP组及U0126组Ca2+荧光强度[(0.085±0.003)、(0.067±0.002)、(0.090±0.003)]、ROS荧光强度[(0.060±0.002)、(0.051±0.005)、(0.076±0.003)]均降低(P<0.05),HP组低于MP组和U0126组(P<0.05).与缺氧组GaN活性(0.61±0.05)u/mg比较,MP组、HP组及U0126组[(0.50±0.05)u/mg、(0.37±0.04)u/mg、(0.54±0.04)u/mg]降低,且HP组低于MP组和U0126组(P<0.05).与缺氧组比较,LP组、MP组、HP组及U0126组HIF-1α、p-ERK1/2蛋白相对表达量升高,且HP组高于LP组、MP组和U0126组(P<0.05);与缺氧组比较,LP组、MP组、HP组及U0126组Caspase-3蛋白相对表达量降低,且HP组低于LP组、MP组和U0126组(P<0.05).结论 异丙酚可减轻缺氧大鼠海马神经元线粒体损伤,其调控机制可能与HIF-1α/ERK通路有关.
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