摘要
目的 探讨外源性乳铁蛋白对1-甲基-4-苯基吡啶(MPP+)诱导的小鼠神经母细胞瘤N2a细胞帕金森病(PD)模型炎症损伤的保护作用及其机制.方法 以250 μmol/L的MPP+诱导N2a细胞损伤构建PD细胞模型,将模型随机分为对照组、乳铁蛋白组、MPP+组和乳铁蛋白+MPP+组.采用CCK-8法检测细胞存活率;Annexin FITC/PI双染法检测细胞凋亡率;Hoechst33342染色检测细胞早期凋亡情况;检测各组的谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和丙二醛(MDA)水平;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测细胞IL-4、IL-6、IL-13、IL-1β、TNF-α mRNA的表达;Western blotting检测不同浓度MPP+(0、100、250、500、1000 μmol/L)N2a细胞的酪氨酸羟化酶(TH)和多巴胺转运体(DAT)蛋白的表达,检测各组的Bcl-2、Bax、Caspase-3、Cleaved Caspase-3、p38、p-p38、JNK、p-JNK、ERK、p-ERK蛋白的表达.结果 MPP+组细胞凋亡率较对照组上升(P＜0.05),乳铁蛋白+MPP+组细胞凋亡率较MPP+组下降(P＜0.05);MPP+组细胞核亮染阳性数目较对照组增加(P＜0.05),而乳铁蛋白+MPP+组亮染阳性数目较MPP+组减少(P＜0.05);与对照组比较,MPP+组Bax蛋白相对表达量升高(P＜0.05),Bcl-2蛋白相对表达量减少(P＜0.05),Cleaved Caspase-3/Caspase-3相对表达量升高(P＜0.05);与MPP+组比较,乳铁蛋白+MPP+组Bax蛋白相对表达量降低(P＜0.05),Bcl-2蛋白相对表达量升高(P＜0.05),Cleaved Caspase-3/Caspase-3相对表达量降低(P＜0.05).与MPP+组比较,乳铁蛋白+MPP+组TH和DAT蛋白相对表达量升高(P＜0.05),GSH-Px活性升高,MDA水平下降(P＜0.05).与MPP+组比较,乳铁蛋白+MPP+组促炎因子IL-6、IL-1β、TNF-α mRNA相对表达量降低,抑炎因子IL-4、IL-13 mRNA相对表达量升高(P＜0.05).与对照组比较,MPP+组p-p38、p-JNK和p-ERK蛋白相对表达量升高,p-p38/p38、p-JNK/JNK、p-ERK/ERK比值增加(P＜0.05);与MPP+组比较,乳铁蛋白+MPP+组p-p38、p-JNK和p-ERK蛋白相对表达量降低,p-p38/p38、p-JNK/JNK、p-ERK/ERK比值降低(P＜0.05).结论 乳铁蛋白可能抑制MAPKs信号通路的活化,以及该通路活化所诱导的炎症反应,从而改善MPP+所致N2a细胞的炎症损伤.
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