摘要
目的 探究miR-122介导Mex3a表达抑制膀胱癌细胞增殖、迁移,促进细胞凋亡的发生机制.方法 通过实时荧光定量聚合酶链反应检测miR-122和Mex3a在正常人膀胱上皮细胞SVHUC-1和人膀胱癌细胞系T24和HT1376中的表达.构建过表达miR-122和低表达Mex3a的T24细胞,并通过CCK-8法、细胞划痕实验和流式细胞术评估miR-122和Mex3a对膀胱癌细胞增殖、迁移和凋亡的影响.双萤光素酶实验验证miR-122和Mex3a的靶向关系.在过表达miR-122的细胞中进一步过表达Mex3a,检测细胞增殖、迁移、凋亡和PI3K/Akt信号通路的变化.结果 SVHUC-1细胞miR-122相对表达量较T24、HT1376细胞高(P＜0.05),Mex3a mRNA相对表达量较T24、HT1376细胞低(P＜0.05).miR-122 mimic组miR-122相对表达量较mimic NC组高(P＜0.05).mimic NC组与miR-122 mimic组在0、24、48、72 h的T24细胞吸光度值比较,经重复测量设计的方差分析,结果:①不同时间点的细胞吸光度值有差异(P＜0.05);②mimic NC组与miR-122 mimic组的细胞吸光度值有差异(P＜0.05),miR-122 mimic组细胞增殖能力较mimic NC组被抑制;③mimic NC组与miR-122 mimic组细胞吸光度值变化趋势有差异(P＜0.05).mimic NC组划痕愈合率较miR-122 mimic组高(P＜0.05).mimic NC组细胞凋亡率较miR-122 mimic组低(P＜0.05).mimic NC组WT-Mex3a相对表达量较miR-122 mimic组高(P＜0.05).mimic NC组Mex3a mRNA相对表达量较miR-122 mimic组高(P＜0.05).si-NC组Mex3a mRNA相对表达量较si-Mex3a组高(P＜0.05).si-NC组p-PI3K、p-Akt蛋白较si-Mex3a组高(P＜0.05).si-NC组与si-Mex3a组在0、24、48和72 h的T24细胞吸光度值比较,经重复测量设计的方差分析,结果:①不同时间点间的细胞吸光度值有差异(P＜0.05);②si-NC组与si-Mex3a组细胞吸光度值有差异(P＜0.05);③si-NC组与si-Mex3a组细胞吸光度值变化趋势有差异(P＜0.05).si-NC组划痕愈合率较si-Mex3a组高(P＜0.05).si-NC组细胞凋亡率较si-Mex3a组低(P＜0.05).miR-122 mimic+oe-Mex3a组Mex3a mRNA相对表达量较miR-122 mimic+oe-N组高(P＜0.05).miR-122 mimic+oe-NC组p-PI3K、p-AKT蛋白相对表达量较miR-122 mimic+oe-Mex3a组低(P＜0.05).miR-122 mimic+oe-NC组与miR-122 mimic+oe-Mex3a组在0、24、48、72 h的T24细胞吸光度值比较,经重复测量设计的方差分析,结果:①不同时间点的细胞吸光度值有差异(P＜0.05);②miR-122 mimic+oe-NC组与miR-122 mimic+oe-Mex3a组细胞吸光度值有差异(P＜0.05),miR-122 mimic+oe-Mex3a组较miR-122 mimic+oe-NC组细胞增殖能力增强;③miR-122 mimic+oe-NC组与miR-122 mimic+oe-Mex3a组细胞吸光度值变化趋势有差异(P＜0.05).miR-122 mimic+oe-NC组划痕愈合率较miR-122 mimic+oe-Mex3a组低(P＜0.05).miR-122 mimic+oe-NC组细胞凋亡率较miR-122 mimic+oe-Mex3a组高(P＜0.05).结论 miR-122可能通过抑制Mex3a的表达,抑制PI3K/Akt信号通路,从而抑制膀胱癌细胞的增殖、迁移,并促进凋亡.
基金项目
湖南省自然科学基金(2021JJ70092)
湖南省卫生健康委2020年度科研课题(20200044)
2020年度湖南省教育厅科学研究项目(20C1174)
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