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结直肠癌细胞β-catenin蛋白脱酰胺化修饰的实验研究
Identification of deamidation modification of β-catenin in colorectal cancer cell lines
向源楚 1廖雨洁 2陈杰 1沈绎伦 2李虎 1彭健1
作者信息
- 1. 中南大学湘雅医院老年医学老年外科,湖南长沙 410008
- 2. 中南大学生命科学学院,湖南长沙 410013
- 折叠
摘要
目的 鉴定结直肠癌细胞β-catenin的脱酰胺化修饰及其相关脱酰胺化酶.方法 采用二维电泳结合脱酰胺化抑制剂6-重氮-5-氧代-L-正亮氨酸(DON)方法鉴定内源性β-catenin蛋白脱酰胺修饰的存在.通过β-catenin蛋白的纯化与质谱分析筛选出β-catenin蛋白候选可能的脱酰胺化酶.利用免疫共沉淀实验检测候选脱酰胺化酶与β-catenin蛋白的相互作用.结果 二维电泳在结直肠癌细胞系HCT116中鉴定出β-catenin蛋白可以发生脱酰胺化修饰.成功构建pEE14.4-β-catenin质粒表达载体,并且在细胞中成功验证其表达;利用蛋白纯化结合质谱分析鉴定出β-catenin蛋白的候选脱酰胺化酶——谷氨酰胺酶复合酶(CAD);Western blotting再次验证CAD能够与内源性β-catenin蛋白发生相互作用.结论 结直肠癌细胞β-catenin蛋白能够发生脱酰胺化修饰,CAD蛋白可能为介导β-catenin蛋白脱酰胺化修饰的相关酶.
关键词
结直肠癌/β-catenin/脱酰胺化/谷氨酰胺酶复合酶Key words
colorectal cancer/β-catenin/deamidation/CAD引用本文复制引用
基金项目
湖南省自然科学基金(2023JJ30869)
长沙市科技计划(kq2014227)
出版年
2023