摘要
目的 观察白藜芦醇(RES)对过氧化氢H2O2诱导的小鼠精原细胞(Gc-1 spg)氧化应激损伤的作用.方法 H2O2复制Gc-1 spg细胞氧化应激损伤模型,设置空白组、H2O2组(800 μmol/L)、H2O2 +5 μmol/L RES组、H2O2 +10 μmol/L RES组和H2O2+15 μmol/L RES组.检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平,CCK-8法检测细胞活力,JC-1试剂盒检测线粒体膜电位,Mito Tracker®® Green FM试剂盒检测活细胞线粒体水平,Hoechst 33342染色检测细胞核凋亡率,Western blotting检测凋亡蛋白Bax、Bcl-2和Caspase-3表达.结果 浓度为800 μmol/L H2O2处理Gc-1 spg细胞6 h时达到实验要求(P<0.05).与空白组比较,各H2O2组细胞活力降低(P<0.05),与H2O2组比较,H2O2 +5 μmol/L RES组、H2O2+ 10 μmol/L RES组、H2O2 +15 μmol/L RES组细胞活力升高(P<0.05).与空白组比较,各H2O2组的GSH-Px和SOD水平降低(P<0.05),LDH和MDA水平升高(P<0.05);与H2O2组比较,H2O2 +5 μmol/L RES组、H2O2+ 10 μmol/L RES组、H2O2 +15 μmol/L RES组GSH-PX和SOD水平降低(P<0.05),LDH和MDA水平升高(P<0.05).与空白组比较,H2O2组细胞的红/绿荧光比值降低,提示线粒体膜电位降低(P<0.05);与H2O2组比较,H2O2+5 μmol/L RES组、H2O2 +10 μmol/L RES组、H2O2 +15 μmol/L RES组JC-1红/绿荧光比值升高(P<0.05).与空白组比较,H2O2 组细胞线粒体数明显减少(P<0.05);与H2O2 组比较,H2O2 +5 μmol/L RES组、H2O2+ 10 μmol/L RES组、H2O2 +15 μmol/L RES组细胞荧光强度升高(P<0.05).与空白组比较,H2O2组大量细胞核皱缩、碎裂,染色程度明显增强,细胞凋亡严重;与H2O2组比较,H2O2 +5 μmol/L RES组、H2O2+10 μmol/L RES组、H2O2 +15 μmol/L RES组细胞凋亡率降低(P<0.05).与空白组比较,H2O2组凋亡蛋白Bax和Caspase-3相对表达量增加(P<0.05),Bcl-2相对表达量减少(P<0.05);与H2O2组比较,H2O2 +5 μmol/L RES组、H2O2 +10 μmol/L RES组、H2O2 +15 μmol/L RES组Bax和Caspase-3相对表达量降低(P<0.05),Bcl-2相对表达量增加(P<0.05).结论 RES对H2O2诱导的Gc-1 spg细胞氧化应激损伤具有保护作用,这种保护作用与RES浓度有关.
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