摘要
目的 通过检测脑、结肠、血清中血管活性肠肽(VIP)、垂体腺苷酸环化酶激活多肽(PACAP)水平,探讨强的松治疗免疫性血小板减少症(ITP)的潜在机制.方法 BALB/c小鼠18只,SPF级,体重18～22 g,雌雄各半,采用全自动血细胞计数仪检测血小板计数,依据血小板计数采用区间分组法随机分为正常组、模型组及强的松组,每组6只.正常组注射生理盐水,模型组和强的松组注射抗小鼠血小板血清(APS)复制ITP动物模型.强的松组在模型复制第8天起开始强的松干预,正常组和模型组则予以生理盐水;注射APS前、注射后第4天、实验第8天(给药第1天)、实验第12天(给药第5天)、实验第15天(给药第8天)动态检测血小板计数;实验结束后采用酶联免疫吸附试验(ELISA)分别检测小鼠脑、结肠、血清中VIP、PACAP含量;用免疫组织化学法观察小鼠肠系膜淋巴结淋巴细胞P53蛋白表达的变化;原位末端转移酶标记法(TUNEL)检测小鼠肠系膜淋巴结淋巴细胞凋亡率的变化.采用ELISA检测小鼠脾脏中γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-10(IL-10)、白细胞介素-17A(IL-17A)的水平.结果 与正常组比较,模型组及强的松组注射APS后,小鼠生命活力明显减弱,并于实验第8天出现皮肤渗血等现象;强的松组经药物干预后,小鼠饮食量和体重均增加,毛色恢复光亮,渗血点减少.实验各组小鼠注射APS前、注射后第4天、实验第8天(给药第1天)、实验第12天(给药第5天)、实验第15天(给药第8天)不同时间点的外周血小板计数比较:①不同时间点的外周血小板计数有差异(F =20.618,P =0.000);②3组的外周血小板计数有差异(F =59.621,P =0.000);③3组的外周血小板计数随时间变化趋势有差异(F =7.072,P =0.000).与正常组比较,模型组小鼠肠系膜淋巴结淋巴细胞P53蛋白表达升高(P＜0.05),淋巴细胞凋亡率升高(P＜0.05).与模型组比较,强的松组小鼠肠系膜淋巴结淋巴细胞P53蛋白表达降低(P＜0.05),淋巴细胞凋亡率降低(P＜0.05).与正常组比较,模型组小鼠在脑、结肠、血清中VIP、PACAP水平均下降(P＜0.05);与模型组比较,强的松组小鼠在脑、结肠、血清中VIP水平均升高(P＜0.05);强的松组小鼠在脑、结肠中PACAP水平均升高(P＜0.05).与正常组比较,模型组小鼠脾脏中IFN-γ、IL-17A水平均升高(P＜0.05),IL-4、IL-10水平均下降(P＜0.05);与模型组比较,强的松组小鼠脾脏中IFN-γ、IL-17A水平均下降(P＜0.05),IL-4、IL-10水平均上升(P＜0.05).结论 基于VIP/PACAP调节肠道免疫功能可能是强的松治疗ITP的潜在机制之一.
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