目的:建立黑豆药材的指纹图谱和5种异黄酮类成分的含量测定方法,为更好地控制该药材的质量提供参考.方法:采用高效液相色谱法(HPLC)建立指纹图谱并检测5种异黄酮类成分的含量.色谱柱为Phenomenex C18,流动相为乙腈-0.12％甲酸水溶液(梯度洗脱),流速为1 mL/min,检测波长为260 nm,柱温为30℃,进样量为10μL.以大豆苷为参照,绘制12批黑豆药材样品的HPLC指纹图谱,采用《中药特征指纹图谱相似度评价系统》(2012A版)进行相似度评价,确定共有峰;分别采用SPSS 20.0软件和SIMCA 13.0软件进行聚类分析和主成分分析.结果:12批黑豆药材样品共有19个共有峰,相似度均大于0.94;指认了5个成分,分别为大豆苷、黄豆黄苷、染料木苷、大豆苷元、染料木素.聚类分析结果显示,12批黑豆药材样品可聚为两类,即S1～S3聚为一类,S4～S12聚为一类.主成分分析结果显示,2个主成分因子的方差贡献率分别为53.261％、40.715％,累积方差贡献率为93.976％.上述5种成分的质量浓度线性范围分别为5.97～191.00μg/mL(r=0.9999)、1.05～33.46μg/mL(r=0.9999)、8.93～285.61μg/mL(r=0.9995)、0.82～26.33μg/mL(r=0.9999)、0.93～29.64μg/mL(r=0.9997);定量限分别为0.8811、0.6116、0.0786、0.2433、0.5116μg/mL,检测限分别为0.2643、0.2447、0.0214、0.1248、0.1067μg/mL;精密度、稳定性、重复性、耐用性试验的RSD均小于5％;加样回收率为95.15％～96.56％(RSD=0.51％,n=6)、98.52％～103.45％(RSD=1.88％,n=6)、95.37％～97.91％(RSD=0.95％,n=6)、99.75％～102.00％(RSD=0.78％,n=6)、100.26％～103.65％(RSD=1.21％,n=6).12批黑豆药材中上述5种成分的含量分别为0.1783～0.2659、0.0217～0.0962、0.2885～0.5972、0.0141～0.0588、0.0129～0.0829 mg/g.结论:所建指纹图谱和5种异黄酮类成分的含量测定方法均可用于黑豆药材的质量控制;不同产地黑豆药材中异黄酮类成分相似,但含量有所差异.
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