摘要
目的 研究不同来源附子水提物对大鼠心肌细胞H9c2毒性的影响,探讨其毒性剂量限值及其检测限,拟从生物活性层面对附子进行质量控制.方法 由中国中药有限公司提供4个批次的附子水提物,批号分别为:HSPYN、HSPSXHZ、HSPSCJY和HSPSCJY1.首先对细胞试验条件进行优化,并从附子水提物抑制心肌细胞活力的量效关系、精密度、重复性等方面进行考察.以CCK-8法测定H9c2心肌细胞的生长曲线,确定优选的细胞密度及药物作用时间;确定附子水提物影响心肌细胞活力的量效曲线,确定药物作用的限值.对不同来源的4批附子药材水提物进行毒性评价,找出附子水提物剂量限值及抑制H9c2细胞活力的检测限.结果 在不同细胞种植密度条件下,H9c2细胞在0～48 h为增殖期,48～60 h到达平台期,60～72 h进入衰亡期;选用0.5×105/mL细胞密度种植于96孔板,药物作用12 h作为实验条件;批号为HSPYN的附子水提物浓度范围在15.6、31.3、62.5、125.0μg·mL-1条件下,对H9c2细胞毒性可呈现一定的量效关系,抑制率分别为24.5±3.4％、26.9±6.2％、27.3±8.8％和39.5±11.3％.阳性对照药选择新乌头碱(100μg·mL-1),抑制率范围在24.6％～32.4％.通过对4个批次附子水提物抑制心肌细胞活性的精密度及重复性进行考察,确定了药物浓度在15.6μg·mL-1其抑制率稳定在21.4±1.9％ 范围内.结论 结合附子的临床功能主治及毒副作用,采用附子抑制心肌细胞活力的效应作为生物活性评价指标,在本研究确定的试验条件下,确定15.6μg·mL-1可作为限值剂量.在该限值浓度下对大鼠心肌H9c2细胞活力抑制率为20％～24％,可判定为质量合格.
基金项目
北京市科技计划项目(Z171100001717028)
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