摘要
目的:探讨脑源性神经营养因子(BDNF)基因过表达慢病毒载体的构建和包装,检测其在大鼠海马原代神经元中的表达.方法:利用聚合酶链式反应(PCR)技术扩增Bdnf基因的exons4和CDS序列,将其克隆到pcDNA3.1-mCherry载体上,构建pcDNA3.1-exons4-Bdnf-mCherry慢病毒表达载体.重组质粒经KpnI和EcoRI双酶切鉴定和测序验证.使用三质粒包装系统将重组质粒pcDNA3.1-exons4-Bdnf-mCherry和慢病毒辅助包装质粒pMDLg/pRRE、pRSV-Rev和pCMV-VSV-G共转染293T细胞,制备并浓缩慢病毒颗粒,感染大鼠原代海马神经元,荧光显微镜和实时荧光定量PCR检测目的基因在原代海马神经元中的表达.结果:成功构建pcDNA3.1-exons4-Bdbf-mCherry慢病毒过表达载体,转染后的293T细胞表达红色荧光,并在培养大鼠海马原代神经元中表达增加(P<0.05).结论:成功构建含有特定转录本的Bdnf基因过表达慢病毒载体,为进一步深入研究Bdnf的作用提供技术基础.
基金项目
山西省基础研究计划面上项目(20210302123305)
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