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大鼠海马神经细胞VDAC1基因shRNA慢病毒表达载体的构建及干扰效果评价

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目的:构建线粒体电压依赖性阴离子通道(VDAC1)短发卡样RNA重组慢病毒(LV)载体,沉默海马神经细胞VDAC1基因表达,观察所构建的慢病毒载体对海马神经细胞的干扰效果.方法:根据基因库提供的大鼠VDAC1基因的核苷酸序列(序列号为:AB039662.1),设计合成3条LV3-VDAC1-shRNA及1条无义的阴性表达载体;将构建好的慢病毒载体转染到海马神经细胞,按照不同的转染条件对细胞分为空载组、对照(NC)组、病毒组,分别在病毒感染复数(MOI)值在100和10的条件下进行转染;采用荧光定量PCR和Western blot的方法分别检测VDAC1基因在mRNA水平和蛋白水平的表达.结果:与空载组相比,慢病毒感染组的扩增倍数均大于1,VDAC1基因在mRNA水平与蛋白水平表达均明显升高(P<0.05);与对照组相比,病毒感染复数(MOI)=10与MOI=100之间没有显著差异(P>0.05);PCR结果与Western blot结果综合来看,VDAC1转录水平表达越高,蛋白水平表达越低,呈现反向关联的状态.结论:三种慢病毒对海马神经细胞都有干扰效果,VDAC1基因的mRNA表达和蛋白表达是一种反向关联的状态.

郑刘晔、奚用勇、张晗、蒋与刚

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军事科学院军事医学研究院环境医学与作业医学研究所,天津300050

蚌埠医学院,蚌埠233000

杭州医学院临床学院,杭州310000

郑州大学,郑州450001

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VDAC1 慢病毒 转染 海马神经细胞 大鼠

国家自然科学基金

81872606

2022

10.12047/j.cjap.6308.2022.080

中国应用生理学杂志
中国生理学会,军事医学科学院,卫生学环境医学研究所

中国应用生理学杂志

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：0.805
ISSN：1000-6834
年,卷(期)：2022.38(5)
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