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PUMA对高糖诱导的大鼠H9C2心肌细胞凋亡的作用及机制

Effects of PUMA knockout on the apoptosis of H9 C2 cardiomyocytes induced by high glucose

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目的:观察促凋亡蛋白p53上调凋亡调控因子(PUMA)在高糖所致H9C2心肌细胞凋亡中的作用及机制.方法:H9 C2心肌细胞随机分为对照组(使用5.5 mmol/L葡萄糖作用于细胞)和高糖组(使用35 mmol/L葡萄糖作用于细胞,HG组)分别刺激6 h,12 h,24 h和48 h,每组设复孔5个,TUNEL染色检测细胞凋亡率;RT-PCR及Western blot法分别测定PUMA mRNA及蛋白表达情况;JC-1法检测线粒体膜电位;Western blot测定caspase-3表达和细胞色素c(Cyt C)释放.H9C2细胞随机分为四组,对照组、高糖(35 mmol/L)、HG+si-scramble组(使用si-scram-ble转染心肌细胞24 h,使用35 mmol/L葡萄糖作用于细胞)和Si-PUMA组(使用si-PUMA转染心肌细胞24 h,使用35 mmol/L葡萄糖作用于细胞),观察抑制PUMA表达对高糖诱导细胞凋亡率、线粒体膜电位、Cyt C的影响.结果:与对照组相比,高糖刺激心肌细胞组TUNEL染色阳性率、活化caspase-3和PUMA表达明显升高(P<0.05或P<0.01),细胞损伤和PUMA表达增高具有时间依赖性,其中高糖24 h组和48 h细胞凋亡率和PUMA表达差异无统计学意义,后续实验采用高糖刺激24 h作为作用时间.与高糖组相比,HG+si-PUMA组PUMA表达抑制、线粒体膜电位恢复、Cyt C释放减少、心肌细胞凋亡减少(P<0.05或P<0.01);HG+si-Scramble组与高糖组相比,PUMA表达、线粒体膜电位、Cyt C释放、心肌细胞凋亡均无显著性差异(P>0.05).结论:PUMA介导高糖所致的大鼠心肌细胞凋亡,提示PUMA可能是糖尿病心肌病治疗的一个重要的靶基因.

郭佳、李志东、肖传实、边云飞

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山西医科大学第一医院高血压科,太原030001

山西医科大学药理学教研室,太原030001

山西医科大学第二医院心内科,太原030001

促凋亡蛋白p53上调凋亡调控因子 高糖 心肌细胞 细胞培养 凋亡 细胞色素C

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2022

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中国应用生理学杂志
中国生理学会,军事医学科学院,卫生学环境医学研究所

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影响因子：0.805
ISSN：1000-6834
年,卷(期)：2022.38(5)
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