目的:探讨新型SUR2B/Kir6.1亚型KATP通道开放剂埃他卡林对尿酸所致肾脏细胞(肾小球内皮、系膜和肾小管上皮细胞)损伤干预作用及其机制.方法:①实验分组:对照组(0 mg/L尿酸损伤24 h);模型组(1200 mg/L尿酸损伤24 h);埃他卡林预处理组(终浓度为0.01、0.1、1、10、100μmol/L预孵育24 h+1200 mg/L尿酸损伤24 h);KATP拮抗组(10μmol/L的格列苯脲孵育1 h后,加入10μmol/L埃他卡林共孵育24 h+1200 mg/L尿酸损伤24 h).②采用MTT法、流式细胞术检测细胞存活率;免疫荧光检测细胞Kir6.1、SUR2B的蛋白表达及细胞中NF-κB的核转位;Western blot检测细胞Kir6.1、SUR2B的蛋白表达;用荧光强度分析法检测单核细胞对内皮细胞的粘附;用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组培养液中MCP-1抗原含量.结果:1200 mg/L尿酸作用于肾小球内皮、系膜和肾小管上皮细胞24 h后,与对照组相比,显著降低细胞存活率(P均<0.01).在肾小球内皮、系膜细胞损伤模型中,埃他卡林0.1、1、10、100μmol/L预处理组与模型组相比,显著升高细胞存活率(P<0.05,P<0.01).KATP拮抗剂组与对照组比,细胞存活率显著降低(P<0.01),与模型组比无显著差异(P>0.05),与埃他卡林10μmol/L预处理组比有显著差异(P<0.05,P<0.01).在肾小管上皮细胞损伤模型中,埃他卡林10、100μmol/L预处理组与模型组相比,显著升高细胞存活率(P<0.05).KATP拮抗剂组与对照组比,细胞存活率显著降低(P<0.01),与模型组比无显著差异(P>0.05).肾小球内皮、系膜和肾小管上皮细胞中,模型组与对照组相比,显著升高Kir6.1、SUR2B的蛋白表达(P均<0.05).10μmol/L埃他卡林预处理组与模型组相比,显著抑制上调Kir6.1、SUR2B蛋白的表达(P均<0.05).KATP拮抗剂组Kir6.1、SUR2B的蛋白表达升高,与模型组比均无显著差异(P>0.05).1200 mg/L尿酸与肾小球内皮细胞孵育24 h后,与对照组相比,单核细胞对内皮细胞的黏附增多(P<0.01).埃他卡林10μmol/L预处理组与模型组相比,显著抑制单核细胞对内皮细胞的黏附(P<0.05).KATP拮抗剂组单核细胞对内皮细胞的黏附增多,与模型组无显著差异(P>0.05).1200 mg/L尿酸刺激肾小球内皮细胞24 h后,与对照组相比,显著升高MCP-1分泌量(P<0.05).埃他卡林10μmol/L预处理组与模型组比,显著降低MCP-1的分泌量(P<0.05).KATP拮抗剂组MCP-1的分泌量增多,与模型组比无显著差异(P>0.05).肾小球内皮细胞受到尿酸刺激后,NF-κB从胞浆转位到胞核,当提前孵育ATP敏感性钾通道开放剂,再用尿酸刺激,可减少NF-κB转位到胞核.KATP拮抗剂可以逆转其作用.结论:新型SUR2B/Kir6.1亚型KATP通道开放剂埃他卡林对尿酸所致肾脏细胞的损伤有明显的干预作用,其机制可能与激活细胞膜KATP通道蛋白有关.
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