摘要
目的:研究SIX2基因对牛骨骼肌卫星细胞增殖的影响.方法:以牛骨骼肌卫星细胞为实验材料,采用实时定量PCR法检测增殖24 h、48 h、72 h时牛骨骼肌卫星细胞中SIX2基因的表达量.通过同源重组构建SIX2基因过表达载体,将SIX2基因过表达质粒和对照组空质粒转染至牛骨骼肌卫星细胞中,每组3个复孔.分别在转染细胞24 h、48 h、72 h时采用MTT法检测细胞活力;转染细胞48 h时,采用流式细胞术检测细胞周期、实时定量PCR(qRT-PCR)和蛋白质免疫印迹(Western blot)检测细胞增殖标志基因的表达.结果:随着牛骨骼肌卫星细胞增殖,SIX2 mRNA表达升高;与对照组相比,SIX2基因过表达质粒组的SIX2 mRNA和蛋白表达量分别升高了18和2.6倍(P<0.01)细胞活力增加(P<0.01),G1细胞比例降低了24.6％,S期和G2期细胞比例分别升高了20.3％、4.31％(P<0.01),Pax7基因mRNA和蛋白的表达量分别升高了15.84和1.22倍,增殖标志性基因PCNA、CCNB1 mRNA和蛋白的表达量分别升高了4.82、2.23和1.55、1.46倍(P<0.01).结论:过表达SIX2基因促进牛骨骼肌卫星细胞增殖.
基金项目
国家青年科学基金(31801148)
黑龙江省自然科学基金(LH2021C099)
黑龙江省教育厅基本业务专项(135109260)
齐齐哈尔大学研究生创新科研项目(YJSCX2022024)
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