摘要
目的:研究香烟烟雾提取物(CSE)对巨噬细胞线粒体功能的影响.方法:本研究选取RAW264.7巨噬细胞进行实验.当细胞融合度达70％左右,弃旧培养液,将100％CSE原液用无血清的DMEM和FBS稀释成1％、5％、15％、25％和90％CSE加入到孔板中,采用CCK-8法检测不同浓度CSE处理RAW264.7细胞24 h的细胞活性;再选取最佳CSE浓度分别处理细胞0 h、24 h、48 h、72 h,CCK-8法检测CSE处理细胞不同时间组细胞活性.0％、5％和25％CSE处理24 h后,Annexin V-FITC/PI染色检测细胞坏死和凋亡情况;JC-1线粒体膜电位检测试剂盒检测细胞线粒体膜受损情况;ROS特异性染料DCFH-DA对小鼠巨噬细胞进行染色后,流式细胞计数法测定荧光度及ROS阳性巨噬细胞数目比例;增强型ATP检测试剂盒检测细胞内ATP浓度.结果:①和0％CSE组比较,1％CSE处理组细胞活性显著增加(P<0.01),当CSE浓度为5％以上时细胞活性显著下降(P<0.05);使用5％CSE处理巨噬细胞,随着处理时间的增加细胞活性显著下降(P<0.01).②和0％CSE组比较,5％CSE和25％CSE处理主要导致巨噬细胞坏死,引起巨噬细胞线粒体膜电位显著下降、ROS生成显著增加(P<0.01)、ATP浓度显著减少(P<0.05或P<0.01),且25％CSE处理组的变化更为显著(P<0.05或P<0.01).结论:CSE处理可能影响巨噬细胞线粒体功能,进而导致细胞活性下降并出现坏死.
基金项目
山西省科技厅自然科学研究面上项目(202203021211242)
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