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熊果酸通过hedgehog信号通路调控结直肠癌细胞HCT116自噬的机制研究

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研究旨在证明熊果酸通过抑制hedgehog信号通路激活结直肠癌HCT116细胞的自噬。采用MTT法测定熊果酸对HCT116细胞活力的影响;结晶紫染色和划痕试验分别检测熊果酸对HCT116细胞增殖和迁移的影响。针对自噬的研究，首先进行时间点的筛选，利用Cell MeterTM Autophagy Assay Kit检测熊果酸作用于HCT116不同时间点的自噬荧光强度;Western blot 法检测熊果酸作用于HCT116不同时间点的自噬蛋白P62的表达水平。然后利用Cell MeterTM Autophagy Assay Kit检测不同剂量熊果酸对HCT116细胞自噬荧光强度的影响;Western blot法检测不同剂量熊果酸对HCT116细胞LC3Ⅱ和P62蛋白表达水平的影响。进一步采用AdPlus-mCherry-GFP-LC3B腺病毒转染检测熊果酸对HCT116细胞自噬流的影响;熊果酸与自噬抑制剂氯喹(CQ)联合利用Western blot法检测自噬蛋白LC3Ⅱ的表达水平。在机制方面，通过Western blot法检测熊果酸对HCT116细胞中hedgehog信号通路相关蛋白的影响。实验结果表明，熊果酸抑制HCT116细胞的活性、增殖和迁移;增强HCT116细胞自噬体的荧光强度，同时升高自噬标志蛋白LC3Ⅱ表达水平和抑制P62的表达水平，并且呈时间和剂量依赖性;熊果酸激活HCT116细胞自噬流，表现为熊果酸导致自噬荧光斑点聚集并增强自噬体的荧光强度，而且与单独使用熊果酸相比，联合使用自噬抑制剂CQ能提高LC3Ⅱ的表达水平;熊果酸降低hedgehog信号通路中PTCH1，GLI1，SMO，SHH，c-Myc的表达水平，提高Sufu的表达水平。总之，该研究表明熊果酸激活结直肠癌HCT116细胞自噬，其机制可能是通过抑制hedgehog信号通路活性。
Mechanism of ursolic acid in regulating colorectal cancer cell HCT116 autophagy through hedgehog signaling pathway

何曼、张梦、孙强、曾沙、陈莉、赵晖、杨寒、刘茂伦、任珊、徐海波

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成都中医药大学药学院药理系,四川成都611137

熊果酸 结直肠癌 hedgehog信号通路 自噬

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2021

10.19540/j.cnki.cjcmm.20201207.403

中国中药杂志
中国药学会

中国中药杂志

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：1.718
ISSN：1001-5302
年,卷(期)：2021.46(5)
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