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优化雌激素受体α蛋白的可溶性表达条件

The condition optimization of estrogen receptorαsoluble expression

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目的 构建雌激素受体α配体结合域(ERα-LBD)表达载体,优化表达条件得到可溶性ERα-LBD蛋白.方法 在Addgene网站检索关键词ESR(雌激素受体,estrogen receptor),选择符合条件的质粒载体pcDNA-HA-ER WT(Addgene plasmid # 49498;http://n2t.net/addgene: 49498;RRID:Addgene_49498),设计引物并扩增得到目的片段ERα-LBD,分别构建蛋白表达载体pET-28a-LBD和pGEX-4T1-LBD,改变诱导温度、异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)浓度以及诱导时间对表达条件优化.待细菌裂解并提取蛋白后进行凝胶电泳,可在细菌上清的泳道中观察到明显的紫色蛋白表达条带,即为可溶性ERα-LBD蛋白.结果 pET-28a-LBD重组质粒未能表达重组蛋白ERα-LBD,重组质粒pGEX-4T1-LBD在Rosetta和BL21(DE3)感受态中以1 mmol/L IPTG诱导仅能得到包涵体;以0.2 mmol/L IPTG 16℃过夜诱导培养,则可得到可溶性ERα-LBD蛋白.结论 成功构建ERα-LBD表达载体并优化诱导表达条件,获得可溶性ERα-LBD蛋白.

路晓庆、白文启、刘向荣、杨芮、张继萍、郭晋锋、陈晓霞、张桓虎

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雌激素受体α配体结合域 重组表达载体 条件优化 可溶性表达

山西省科技成果转化引导专项项目山西省重点研发计划项目

201704D131031201903D321162

2020

10.3760/cma.j.cn421213-20200207-00062

中华实验外科杂志
中华医学会

中华实验外科杂志

CSTPCD北大核心
影响因子：0.759
ISSN：1001-9030
年,卷(期)：2020.37(7)
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