查看更多>>摘要：目的 检测三结构域蛋白家族22(TRIM22)在前列腺癌组织及细胞中的表达水平,探讨TRIM22对前列腺癌细胞生物学功能的影响.方法 运用GEPIA数据库分析TRIM22基因在前列腺癌组织中的表达水平,先收集武汉大学人民医院16例男性前列腺癌及癌旁标本[年龄(64.45±11.34)岁],采用实时定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白质印记法(Western blot)技术检测前列腺癌及癌旁标本、前列腺癌细胞系PC3、DU145及正常前列腺细胞RWPE-1中TRIM22 mRNA和蛋白质的表达差异.利用免疫组织化学染色检测前列腺癌组织及癌旁组织中TRIM22蛋白的表达.再在PC3和DU145细胞中转染TRIM22过表达质粒及其对照,将细胞分为PC3实验组、PC3对照组和DU145实验组、DU145对照组,采用RT-qPCR和Western blot验证转染效率.采用细胞克隆形成实验和EdU实验检测TRIM22基因过表达后对细胞增殖的影响;蛋白质印记法验证过表达后对铁死亡关键蛋白的表达的影响;组间计量数据比较采用t检验.结果 GEPIA数据库显示TRIM22基因在前列腺癌组织中表达水平降低(P＜0.05);RT-qPCR和Western blot结果表明癌旁组织中TRIM22的表达高于肿瘤组织(mRNA:1.42±0.04 比 1.01±0.06,t=5.590,P＜0.05;蛋白:156.67±5.54 比97.67±3.76,t=8.806,P＜0.05).在 PC3 及 DU145 细胞中,TRIM22 相对表达水平低于 RWPE-1 细胞(mRNA:0.51±0.05 比 1.03±0.05、0.61±0.05 比 1.03±0.05,t=7.320、5.080,P＜0.05;蛋白:56.00±4.04 比 104.05±5.19、67.33±3.76 比 104.05±5.19,t=7.292、5.719,P＜0.05);实验组PC3、DU145细胞中TRIM22基因mRNA和蛋白相对表达水平高于其对照组(mRNA:7.24±0.16比1.03±0.07、5.93±0.14 比 0.98±0.07,t=36.224、46.048,P＜0.01;蛋白:552.33±14.01 比100.67±8.74、435.67±14.05 比 100.33±12.53,t=47.376、30.886,P＜0.01);细胞克隆形成实验结果表明实验组PC3、DU145细胞克隆形成数目低于其对照组[(34.33±7.02)个比(61.33±6.56)个、(30.33±4.04)个 比(55.67±6.51)个,t=4.807、5.729,P＜0.05];EdU 实验中,实验组PC3、DU145 细胞增殖活性低于其对照组[(24.33±4.33)％比(81.67±3.76)％、(20.67±4.41)％比(79.33±6.24)％,t=9.997、8.568,P＜0.05].Western blot 结果提示实验组 PC3、DU145细胞中铁死亡相关蛋白GPX4、SLC7A11相较对照组未见明显变化(GPX4:98.67±10.01比99.67±7.02、99.33±9.61 比 101.33±9.02,t=0.142、0.263,P＞0.05;SLC7A11:98.67±6.11 比102.67±7.51、100.67±8.02 比 99.00±8.54,t=0.716、0.905,P＞0.05);而实验组 PC3、DU145 中NRF2/HO-1 通路蛋白表达明显低于对照组(NRF2:28.67±6.03 比 104.33±10.79、46.33±7.51 比101.33±6.66,t=10.607、9.695,P＜0.05;HO-1:13.33±7.09 比 102.67±7.51、25.33±7.52 比103.33±8.02,t=14.982、1 2.299,P＜0.05).结论 TRIM22在前列腺癌组织和细胞中异常低表达,可作为抑癌基因抑制前列腺癌的发生及发展.
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