目的 观察微小RNA(miRNA,miR)-29a-5p在心肌梗死后心室重塑心肌纤维化中的作用,探讨miR-29a-5p通过靶基因Endoglin调控心肌梗死后心肌纤维化的作用机制.方法 选取2019年1月至2019年10月在郑州大学第二附属医院收治的30例心肌梗死患者和20例非急性冠脉综合征的患者,取血液标本,分别进行血清miR-29a-5p和NTPRO-脑钠肽(BNP)的检测.体内实验,建立小鼠心肌梗死模型,尾静脉分别注射miR-29a-5p mimics和阴性对照试剂.4周后处死小鼠,取部分心肌组织用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)分别对miR-29a-5p、Endoglin、BNP进行检测.体外实验,处死1日龄小鼠,分离获得心肌成纤维细胞并进行培养.将培养的细胞用脂质体2000对细胞进行转染miR-29a-5p mimics和阴性对照试剂,转染后加入50 μmol/L血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)或等体积的磷酸盐缓冲液(PBS)持续48 h.用图像J软件检测各组成纤维细胞的表面积.另取细胞用miR-29a-5pmimics或antagomir,pRL-TK-endoglin-3'端非编码区(3'UTR)载体,pGL3-basic质粒进行共转染.转染48 h,获得细胞,用双荧光素酶报告试验系统检测细胞相对荧光素酶活性,并用Real-time PCR和Western blot分别检测Endoglin在各组的表达.采用单因素方差分析和LSD检验.结果 急性心肌梗死(AMI)患者血清中miR-29a-5p含量[(3.57±0.53) ng/ml]明显降低(F=935.899,P＜0.01),NTPRO-BNP含量明显升高[(9.47±5.06) ng/ml,F=65.440,P＜0.01].小鼠MI组miR-29a-5p表达水平明显降低(0.51±0.12,t=4.315,P＜0.01),在Ang Ⅱ诱导的心肌纤维化模型中同样发现miR-29a-5p的表达水平明显降低(0.65±0.26,t =4.511,P＜0.01).miR-29a-5p mimics处理心肌成纤维细胞中Endoglin蛋白含量和mRNA表达水平降低(0.49±0.09,t =352.312,P＜0.01),在miR-29a-5p antagomir处理心肌成纤维细胞中Endoglin蛋白含量和mRNA表达水平升高(2.15±0.14,t=7.814,P＜0.05).结论 miR-29a-5p是心肌纤维化的重要调节因子.
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